Cytometry. Part A : the journal of the International Society for Analytical Cytology

Trong những năm gần đây, đã có sự nỗ lực to lớn trong việc khắc họa chi tiết về kiểu hình và chức năng của các phân nhóm tế bào T khác nhau ở người, cũng như các con đường phân hóa và vai trò của chúng trong các phản ứng miễn dịch. Tuy nhiên, các nghiên cứu này dường như đã tạo ra nhiều câu hỏi hơn là những câu trả lời rõ ràng. Để làm rõ các vấn đề liên quan đến chức năng và sự phân hóa của các phân nhóm tế bào T, một phiên hội thảo tại hội nghị MASIR 2008 đã được dành riêng cho chủ đề này. Nhiều điểm đồng thuận và bất đồng đã được làm nổi bật trong công trình được trình bày trong phiên này. Chúng tôi ở đây cung cấp một bản trình bày về những điểm này, bao gồm sự đa dạng tương đối của các phân nhóm tế bào T trong các nhiễm trùng do các tác nhân gây bệnh khác nhau, mối quan hệ giữa các đặc điểm kiểu hình và chức năng của tế bào T, và các con đường phân hóa của tế bào T. Cuối cùng, chúng tôi thảo luận về những vấn đề vẫn còn hạn chế sự đồng thuận chung. Xuất bản năm 2008, Wiley-Liss, Inc.

Xét nghiệm khối lượng sử dụng phổ khối lượng nguyên tử kết hợp với các nguyên tố báo cáo tinh khiết đồng vị để đo hiện nay tới 40 tham số trên mỗi tế bào duy nhất. Giống như bất kỳ công nghệ định lượng nào, có một nhu cầu cơ bản về các quy trình đảm bảo chất lượng và chuẩn hóa. Trong trường hợp xét nghiệm khối lượng, biến động tín hiệu theo thời gian do sự thay đổi trong hiệu suất của thiết bị kết hợp với khoảng thời gian giữa các lần bảo trì định kỳ cần phải được tính đến và sau đó chuẩn hóa. Ở đây, các mẫu đã được trộn với các hạt polystyrene nhúng kim loại lanthanide, cho phép theo dõi hiệu suất của thiết bị xét nghiệm khối lượng trong nhiều ngày thu thập dữ liệu. Quy trình được mô tả ở đây bao gồm việc đo đồng thời các hạt và tế bào trên máy xét nghiệm khối lượng, chiết xuất chữ ký dựa trên hạt, và áp dụng một thuật toán cho phép điều chỉnh cả biến động tín hiệu ngắn hạn và dài hạn. Biến động trong cường độ của các hạt còn lại sau khi chuẩn hóa cũng có thể được sử dụng để xác định chất lượng dữ liệu. Việc áp dụng thuật toán cho một phân tích theo chiều dọc kéo dài một tháng của một mẫu máu ngoại biên người đã giảm biên độ dao động tín hiệu trung vị từ 4,9 lần xuống còn 1,3 lần. © 2013 Hiệp hội Quốc tế về Phát triển Xét nghiệm tế bào

Một mục tiêu thường gặp trong phân tích dòng tế bào là phân loại tế bào thành dương tính hoặc âm tính với một đánh dấu cụ thể, hoặc xác định tỷ lệ chính xác giữa tế bào dương tính và âm tính. Điều này đòi hỏi thiết lập máy móc tốt và có thể tái tạo, cũng như việc sử dụng cẩn thận các đối chứng để phân tích và diễn giải dữ liệu. Loại đối chứng nào nên bao gồm trong các loại thí nghiệm dòng tế bào khác nhau là một vấn đề đang được tranh luận và thảo luận. Trong hướng dẫn này, chúng tôi phân loại các đối chứng thành các danh mục khác nhau, mô tả các tùy chọn trong mỗi danh mục, và thảo luận về lợi ích của từng tùy chọn. © 2006 Hiệp hội Quốc tế về Cytology Phân tích

Việc đánh giá các mối nguy tiềm ẩn của vật liệu nano do con người tạo ra đã bị cản trở bởi khả năng quan sát và đo lường hạn chế các hạt nano trong tế bào. Trong nghiên cứu này, các nồng độ khác nhau của hạt nano TiO₂ đã được hòa trộn trong môi trường nuôi cấy tế bào. Suspensions sau đó được siêu âm và phân tích bằng phương pháp tán xạ ánh sáng động và vi kính. Các tế bào biểu mô sắc tố võng mạc (ARPE‐19) được nuôi cấy từ người đã được ủ với các hạt nano TiO₂ tại các nồng độ 0, 0.1, 0.3, 1, 3, 10 và 30 μg/ml trong 24 giờ. Các phản ứng của tế bào đối với các hạt nano đã được đánh giá bằng phương pháp phân tích tế bào chảy và vi kính trường tối. Máy phân tích tế bào chảy FACSCalibur™ đã được sử dụng để đo các thay đổi trong tán xạ ánh sáng sau khi ủ với hạt nano. Cả tán xạ bên và tán xạ phía trước đều thay đổi đáng kể phản ánh sự hiện diện của TiO₂. Từ 0.1 đến 30 μg/ml TiO₂, tán xạ bên tăng liên tục trong khi tán xạ phía trước giảm, có thể do sự phản xạ ánh sáng mạnh bởi các hạt TiO₂. Dựa trên các tham số hình thái và xét nghiệm khả năng sống sót calcein‐AM/iodide propidium, các nồng độ TiO₂ dưới 30 μg/ml TiO₂ gây độc tế bào tối thiểu. Phân tích kính hiển vi được thực hiện trên cùng các tế bào bằng kính hiển vi Nikon E‐800 có nguồn sáng xenon và các vật kính trường tối đặc biệt. Tại các nồng độ thấp nhất của TiO₂ (0.1–0.3 μg/ml), máy phân tích tế bào chảy có thể phát hiện ít nhất 5–10 hạt nano trong mỗi tế bào do sự tán xạ ánh sáng mạnh từ TiO₂. Các vòng hạt nano tập trung được quan sát quanh các nhân ở gần lưới nội mô tại các nồng độ cao hơn. Các dữ liệu này cho thấy rằng sự hấp thụ các hạt nano bên trong tế bào có thể được theo dõi bằng phương pháp phân tích tế bào chảy và xác nhận bằng vi kính trường tối. Cách tiếp cận này có thể giúp đáp ứng một nhu cầu quan trọng của cộng đồng khoa học trong việc đánh giá mối quan hệ giữa liều lượng hạt nano và độc tính tế bào. Những thí nghiệm như vậy có thể được thực hiện nhanh chóng và dễ dàng hơn bằng cách sử dụng máy phân tích tế bào chảy để đo lường cả sự hấp thụ hạt nano và sức khỏe tế bào. Được xuất bản năm 2010 bởi Wiley‐Liss, Inc.

Cytometry khối lượng là một công nghệ mới được giới thiệu, sử dụng kháng thể gắn đồng vị của nguyên tố chuyển tiếp để phát hiện protein trên cơ sở từng tế bào. Bằng cách vượt qua các hạn chế của sự chồng chéo quang phổ phát xạ liên quan đến các fluorochrome sử dụng trong cytometry dòng truyền thống, cytometry khối lượng hiện cho phép đo tới 40 thông số trên mỗi tế bào. Gần đây, một phân tích cytometry khối lượng toàn diện đã được mô tả cho chương trình phân biệt huyết học trong tủy xương của người từ một người hiến máu khỏe mạnh. Nghiên cứu hiện tại mô tả các phương pháp để phân đoạn các giai đoạn chu kỳ tế bào bằng cách sử dụng 5-iodo-2-deoxyuridine (IdU) để đánh dấu các tế bào trong giai đoạn S, đồng thời với các kháng thể chống lại cyclin B1, cyclin A và histone H3 phosphoryl hóa (S28) đặc trưng cho các giai đoạn chu kỳ tế bào khác. Các quy trình đã được phát triển trong đó một kháng thể chống lại protein retinoblastoma phosphoryl hóa (Rb) tại các serine 807 và 811 được sử dụng để tách biệt các tế bào ở các giai đoạn G0 và G1 của chu kỳ tế bào. Phương pháp cytometry khối lượng này đã cho ra các phân bố chu kỳ tế bào của cả quần thể tế bào bình thường và tế bào ung thư mà tương đương với những gì thu được từ các kỹ thuật cytometry huỳnh quang truyền thống. Chúng tôi đã áp dụng điều này để vẽ bản đồ các giai đoạn chu kỳ tế bào của các tế bào trải rộng qua hệ thống huyết học trong tủy xương người khỏe mạnh như một sự chuẩn bị cho các nghiên cứu sau này với ung thư và các rối loạn khác của dòng này. © 2012 Hiệp hội Quốc tế vì sự Tiến bộ của Cytometry

Chúng tôi đã phát triển flowMeans, một phương pháp hiệu quả về thời gian và chính xác để tự động xác định các quần thể tế bào trong dữ liệu phân tích dòng chảy (FCM) dựa trên phân cụm K-means. Khác với K-means truyền thống, flowMeans có thể xác định các quần thể tế bào lõm bằng cách mô hình hóa một quần thể duy nhất với nhiều cụm. flowMeans sử dụng một thuật toán phát hiện điểm thay đổi để xác định số lượng tiểu quần thể, cho phép phương pháp này được sử dụng trong các quy trình phân tích dữ liệu FCM với quy mô lớn. Cách tiếp cận của chúng tôi cho kết quả so với phân tích thủ công của các chuyên gia con người và các thuật toán phân loại tự động tiên tiến hiện tại. flowMeans được cung cấp miễn phí dưới dạng gói mã nguồn mở R thông qua Bioconductor. © 2010 Hiệp hội Quốc tế Phát triển Phân tích tế bào.