Ovid Technologies (Wolters Kluwer Health)

Ít nhất 16 epitope đã được xác định, cung cấp một nhóm các dấu hiệu hình thái để nghiên cứu cấu hình của apolipoprotein (apo) B liên quan đến các yếu tố trong chuỗi của apo B-100. Sáu trong số những epitope này được nhận diện bởi kháng thể đơn dòng (Mabs) hướng vào apolipoprotein B của lipoprotein mật độ thấp (LDL), trong khi ít nhất 10 epitope khác phản ứng với Mabs thu được từ việc tiêm chủng với apo B đã được loại lipid hóa và hòa tan. Năm epitope cũng được biểu hiện trên apo B-48 đã được chỉ định cho đoạn thrombolytic T4 ở phía N-terminus của apo B-100. Không có một trong năm epitope này yêu cầu sự hiện diện của lipid để biểu hiện, cho thấy rằng cấu hình của vùng T4 của apo B phụ thuộc nhiều vào tương tác giữa các chuỗi peptide hơn là tương tác peptide-lipid. Bốn epitope riêng biệt đã được chỉ định cho đoạn thrombolytic trung bình T3 của apo B-100, tất cả đều yêu cầu sự hiện diện của lipid để biểu hiện; những epitope gần với C-terminus của T3 cần có sự tương tác đặc hiệu với este cholesterol. Sự phụ thuộc vào lipid tương tự cũng đặc trưng cho một cụm epitope được xác định tại vùng N-terminus của đoạn T2. Các epitope gần với vị trí cắt T2/T3 và phụ thuộc vào sự hiện diện của este cholesterol để biểu hiện cũng là những epitope phản ứng với Mabs ức chế sự liên kết của LDL với thụ thể của nó. Do đó, khu vực này, ngoài việc chứa hai trình tự có sự tương đồng cấu trúc với miền liên kết thụ thể apo E, có khả năng tạo thành một vị trí liên kết thụ thể quan trọng về mặt sinh lý cho apo B. Cuối cùng, bốn epitope khác không yêu cầu sự hiện diện của lipid để biểu hiện đã được xác định trên T2. Tóm lại, báo cáo hiện tại cho thấy rằng sự tương đồng miễn dịch hóa học của apo B-48 và apo B-100 nằm ở nửa đầu N-terminus của apo B-100, trong khi miền liên kết thụ thể apo B được định vị ở nửa C-terminus của apo B-100 gần với vị trí cắt T2/T3.

The cellular composition of human atherosclerotic plaques was analyzed by immunologic techniques. Plaques were removed from the internal carotid artery during surgery, and a panel of monoclonal antibodies was used to identify cell types. Macrophages stained by Anti-Leu-M3 were found throughout the plaque, particularly in the lipid core region, where 60% of the cells reacted with this antibody. T cells expressing the T3 antigen were most abundant in the fibrous cap, where they constituted 20% of the cell population. T cells were also isolated from the plaque and detected by a rosetting test; many of these T cells were activated, as indicated by the expression of HLA-DR. Other types of leukocytes were uncommon in the plaque. An antibody to the intermediate filament protein, desmin, was used as a marker for smooth muscle cells since some, but not all, vascular smooth muscle cells contain this protein. The desmin-positive cells were uncommon in the nonatherosclerotic intima but were more numerous in the plaque. In conclusion, atherosclerotic plaques are heterogeneous with respect to cellular composition. The smooth muscle cell dominates in the fibrous cap, which also contains many T cells; the lipid core is dominated by macrophages. We suggest that interactions between smooth muscle cells and blood-borne cells are important in the pathogenesis of atherosclerosis.

Chylomicron remnant catabolism appears to be mediated by apolipoprotein (apo) E binding to hepatic lipoprotein receptors. Previously, the apo B,E(LDL) receptor and a unique apo E-binding protein (referred to as the apo E receptor) were isolated from solubilized canine and human livers. In the present study, the apo E-binding fraction was further characterized and found to contain at least three proteins, all of which bind apo E-containing lipoproteins with high affinity. The 56-kDa band was found to contain the alpha- and beta-subunits of F1-ATPase, presumably derived from mitochondrial membranes. In addition, an apo E-binding protein with an apparent Mr approximately equal to 59,000 was identified. The 59-kDa protein displays calcium-independent binding on ligand blots, but displays both calcium-dependent and -independent binding in assays performed with detergent-solubilized protein. The 59-kDa protein recognized lipid-free as well as lipid-bound apo E in ligand blots, and also bound apo E-2, apo E-3, and apo E-4 in a comparable way. Monoclonal antibodies produced against the 59-kDa protein did not react with the 56-kDa proteins. Normal human liver, as well as the liver of a patient lacking the apo B,E(LDL) receptor, possessed the 56-kDa and 59-kDa proteins. These data indicate that liver cells possess at least three proteins, in addition to the apo B,E(LDL) receptor, that bind apo E-containing lipoproteins with high affinity. The physiological role of these proteins in apo E metabolism remains to be determined.

The binding and catabolism of low density lipoprotein (LDL) were studied in cultured skin fibroblasts and/or Epstein-Barr virus-transformed lymphoblastoid cells from 20 familial hypercholesterolemic (FH) homozygotes of 14 Afrikaner kindreds. Cells from available heterozygotes were also analyzed. Good resolution between the normal, heterozygote, and homozygote groups was obtained on the basis of these assays using either cell type. Results obtained with fibroblasts allowed the classification of 13 of these kindreds as being typically receptor-defective, and one kindred with two homozygotes as being receptor-negative. Fibroblasts from homozygotes of the receptor-defective class expressed LDL receptor activities which varied between 3% and 25% of normal. Where two homozygotes from the same family were available for assays (six families), both yielded similar activities. In contrast to fibroblasts, all the lymphoblastoid cells derived from FH homozygotes yielded LDL receptor activities equal to or less than 10% of normal; in a number of cases no significant 125I-LDL binding was detectable. The use of lymphoblastoid cells provides a convenient means for screening for FH at the cellular level. Our results indicate a predominance of a receptor-defective type of abnormality, which is consistent with a founder gene effect in the Afrikaner population.

Bảy kháng thể đơn dòng chống lại lipoprotein mật độ thấp (LDL) ở người đã được đặc trưng về tính đặc hiệu và khả năng can thiệp vào con đường LDL trong các tế bào xơ nhuận nuôi cấy của người. Tính miễn dịch với LDL của hai kháng thể (2D8 và 4G3) đặc biệt nhạy cảm với sự biến đổi của các gốc lysine và arginine trong LDL. Các thí nghiệm đồng nồng độ cho thấy các kháng thể 3A8 và 3A10 có thể phản ứng với cùng một định danh và năm kháng thể (5E11, 3A8, 3A10, 4G3 và 3F5) nhận biết các định danh được nhóm lại trong cùng một khu vực của phân tử. Hai kháng thể còn lại (1D1 và 2D8) phản ứng với các định danh xa rời khu vực này. Khi được thử nghiệm với lượng mol thừa so với LDL, các đoạn Fab của 5E11, 3A8, 3A10, 4G3 và 3F5 (nhưng không phải 1D1 hay 2D8) có khả năng chặn liên kết của 125I-LDL với thụ thể LDL và can thiệp vào việc ức chế LDL đối với sự tổng hợp cholesterol trong các tế bào xơ nhuận nuôi cấy. Việc tăng nồng độ gấp 10 lần không làm thay đổi đáng kể kết quả. Dựa trên các kết quả này, chúng tôi đã đề xuất một bản đồ các định danh như chúng sẽ xuất hiện trong LDL.

Phương pháp lập thể đã được sử dụng để điều tra những thay đổi trong cấu trúc siêu vi của các tế bào cơ trơn trong quá trình hình thành sự dày lên của lớp nội mạc do chấn thương gây ra bằng bóng catheter bơm hơi. Mật độ thể tích của myofilament trong tế bào chất của các khu vực có tế bào cơ trơn đã được đo ở các khu vực có tế bào cơ trơn (có thể thấm tự do màu xanh Evans và do đó nhuộm màu xanh) và ở các khu vực được tái nội mạc hoá (vẫn giữ màu trắng sau khi tiêm màu xanh Evans) của động mạch cảnh thỏ. Hai tuần sau chấn thương, mật độ thể tích của myofilament trong các tế bào cơ trơn của lớp nội mạc ở cả hai khu vực màu trắng và màu xanh đều ít hơn đáng kể so với tế bào cơ trơn lớp giữa (67.9% +/- 3.6%; trung bình +/- SE), với giá trị tương ứng là 38.8% +/- 1.0% và 35.9 +/- 3.3%. Đến 6 tuần sau chấn thương, mật độ thể tích đã tăng đáng kể ở cả khu vực màu trắng (55.1% +/- 3.4%) và khu vực màu xanh (53.5% +/- 3.0%), và các giá trị này không thay đổi đáng kể sau 18 tuần. Mật độ thể tích của myofilament trong các tế bào cơ trơn ở lớp lòng trong các khu vực màu xanh thấp hơn đáng kể so với tế bào lớp giữa đối chứng và vẫn duy trì ở mức thấp (26.7% +/- 2.1%) cho đến 18 tuần sau chấn thương. Chấn thương ban đầu do bóng catheter gây ra đã gây ra tổn thương đáng kể cho các tế bào cơ trơn trong lớp giữa, và các tế bào còn lại trong lớp giữa trải qua những thay đổi tương tự về cấu trúc siêu vi so với các tế bào trong lớp nội mạc mới. Tại thời điểm 2 tuần, các tế bào có mật độ thể tích myofilament thấp (44.9% +/- 2.4%), quay trở lại mức không khác biệt đáng kể so với động mạch đối chứng vào 6 tuần sau chấn thương. Không có sự khác biệt nào trong ước lượng mật độ thể tích của myofilament giữa lớp trong và ngoài của các động mạch bị thương. Những phát hiện này cho thấy, sau khi chấn thương do bóng catheter gây ra, các tế bào cơ trơn ở cả lớp giữa và sự dày lên nội mạc kết quả đều trải qua một sự thay đổi có thể đảo ngược trong cấu trúc siêu vi.

Chúng tôi đã đánh giá tác động của các liều khác nhau của lovastatin, một chất ức chế cạnh tranh của enzym 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase (HMG CoA reductase) - enzym giới hạn tốc độ trong sinh tổng hợp cholesterol, đối với các thông số sự cân bằng cholesterol trong các bạch cầu đơn nhân được lấy từ 19 bệnh nhân có tình trạng tăng cholesterol huyết khối gia đình dị hợp tử. Bệnh nhân được điều trị với các liều lovastatin tăng dần (từ 10 đến 80 mg/ngày theo chế độ uống hai lần/ngày). Hoạt động in vitro của enzym HMG CoA reductase và quá trình tổng hợp cholesterol từ 2-14C-acetate đã được xác định trong các tế bào đơn nhân thu được dưới các điều kiện ổn định sau khi bệnh nhân đã dùng liều 20, 40 hoặc 80 mg/ngày trong 6 tuần. Tổng và độ phân giải cao của 125I-lipoprotein mật độ thấp (LDL) đã được xác định tại thời điểm ban đầu và sau khi dùng lovastatin với liều 80 mg/ngày. Mức cholesterol LDL giảm dần trên nền lovastatin (giảm 38% tại liều 80 mg/ngày, p < 0.005). Những thay đổi này cũng song song với sự tăng 121% trong hoạt động của HMG CoA reductase (p < 0.05) và sự tăng 39% trong tổng hợp cholesterol từ 2-14C-acetate (p < 0.005). Tổng và độ phân giải cao của 125I-LDL tăng từ 27 +/- 3.3 và 12.1 +/- 1.6 ng/4 x 10(6) tế bào/4 giờ chỉ trên chế độ ăn uống lên 69.7 +/- 7.2 và 32.9 +/- 3.6 ng/4 x 10(6) tế bào/4 giờ tương ứng, (trung bình +/- SEM) trong các tế bào đơn nhân lấy từ bệnh nhân dùng 80 mg lovastatin hàng ngày (p < 0.005).(TÓM TẮT BỊ CẮT NGẮN TẠI 250 TỪ)

Cơ chế chính xác mà các axit béo không bão hòa làm giảm cholesterol lipoprotein có mật độ thấp chưa được biết đến. Vì các axit béo không bão hòa cis được đưa vào màng tế bào làm tăng độ lỏng của màng và do đó có thể thay đổi đáng kể các chức năng tế bào phụ thuộc vào màng, chúng tôi đã xem xét tác động của việc đưa linoleate và oleate vào màng tế bào đơn nhân trong máu ngoại vi đối với các tính chất vật lý của màng và đồng thời đối với sự hấp thu và phân hủy lipoprotein có mật độ thấp. Chúng tôi phát hiện rằng sự giàu có membrane với linoleate tăng tốc độ phân hủy lipoprotein có mật độ thấp trong cả tế bào đơn nhân vừa được tách ra và tế bào đơn nhân đã được điều chỉnh lại. Sự giàu có với oleate cũng dẫn đến sự gia tăng tương tự trong phân hủy. Sự hấp thu lipoprotein có mật độ thấp "cụ thể" bởi các tế bào đã được điều chỉnh lại cũng được cải thiện bởi việc đưa linoleate và oleate vào. Sự giàu có với cả hai axit béo này tạo ra một sự gia tăng độ lỏng của màng, như được chỉ ra bởi sự giảm độ phân cực huỳnh quang tại trạng thái ổn định của 1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene được đưa vào màng. Ngược lại, sự giàu có với stearate có ít tác động đến sự hấp thu hoặc phân hủy lipoprotein có mật độ thấp, cũng như không ảnh hưởng đến độ lỏng của màng. Những dữ liệu này chỉ ra một cơ chế mới cho sự giảm thiểu lipoprotein có mật độ thấp do các axit béo không bão hòa gây ra liên quan đến các tác động vật lý của chúng lên màng tế bào khi liên quan đến sự trao đổi chất của lipoprotein.

Các cơ chế mà chất béo không bão hòa đa làm giảm cholesterol lipoprotein mật độ thấp (LDL) và apolipoprotein (apo) B đã được nghiên cứu trên 20 con khỉ cebus (Cebus albifrons) được cho ăn với chế độ ăn chứa dầu ngô hoặc dầu dừa như nguồn chất béo (31% năng lượng) có hoặc không có cholesterol trong chế độ ăn (0.1% theo trọng lượng) trong khoảng 3 đến 10 năm. Việc cho ăn dầu dừa so với dầu ngô dẫn đến sự gia tăng đáng kể nồng độ cholesterol toàn phần trong huyết tương (176%), cholesterol LDL-VLDL (236%), cholesterol HDL (148%), apo B (78%) và apo A-I (112%). Việc bổ sung cholesterol trong chế độ ăn vào dầu ngô so với dầu ngô đơn thuần đã dẫn đến sự gia tăng nhỏ nhưng đáng kể về nồng độ cholesterol toàn phần (44%), cholesterol HDL (40%) và apo A-I (33%). Mặc dù sự gia tăng cholesterol LDL-VLDL có độ lớn tương tự (52%), nhưng chúng gần như không đạt được sự đáng kể thống kê (p nhỏ hơn 0.08), trong khi sự thay đổi nồng độ apo B là không đáng kể. Việc bổ sung cholesterol trong chế độ ăn vào dầu dừa, so với dầu dừa đơn thuần, không dẫn đến sự thay đổi đáng kể nào về cholesterol lipoprotein hoặc apoprotein, mặc dù nồng độ cholesterol LDL-VLDL và giá trị apo B đã tăng lần lượt 22% và 16%. Mặc dù nồng độ cholesterol tự do ở gan không bị thay đổi bởi chế độ ăn, nhưng việc cho ăn dầu dừa so với dầu ngô đã dẫn đến sự gia tăng đáng kể các este cholesterol ở gan (236%) và triglycerid (325%), trong đó chất béo triglycerid tăng thêm khi cholesterol trong chế độ ăn được bổ sung vào dầu dừa (563%). Để đánh giá thêm tác động của những thay đổi chế độ ăn này đối với chuyển hóa LDL, các thí nghiệm động học LDL có gắn iod phóng xạ bình thường và glucose đã được thực hiện. Tốc độ sản xuất LDL apo B không bị thay đổi bởi chế độ ăn. Với việc cho ăn dầu ngô, 63% sự chuyển hóa LDL diễn ra qua con đường tiếp nhận. Việc cho ăn dầu dừa so với dầu ngô dẫn đến sự giảm 50% tỷ lệ phân hủy LDL apo B qua con đường tiếp nhận và giảm 27% phân hủy LDL apo B không qua tiếp nhận. Việc bổ sung cholesterol trong chế độ ăn vào dầu ngô so với dầu ngô đơn thuần không có tác động đáng kể nào đến sự chuyển hóa LDL apo B. Việc bổ sung cholesterol trong chế độ ăn vào dầu dừa so với dầu dừa đơn thuần không liên quan đến sự thay đổi đáng kể nào trong phân hủy LDL apo B không qua tiếp nhận nhưng có liên quan với việc giảm 58% trong phân hủy LDL qua con đường tiếp nhận (p nhỏ hơn 0.059). Những thay đổi về chuyển hóa LDL do chế độ ăn gây ra có mối tương quan đáng kể với lipid gan, vốn giàu axit béo bão hòa. (TÓM TẮT BỊ CẮT NGẮT TỪ 400 TỪ)

Cơ chế mà axit béo không bão hòa trong chế độ ăn hạ thấp cholesterol lipoprotein mật độ thấp (LDL) vẫn chưa được hiểu rõ. Axit béo không bão hòa được tích hợp vào màng tế bào có thể làm tăng tính linh hoạt của màng và do đó, thay đổi đáng kể các chức năng tế bào phụ thuộc vào màng. Do đó, chúng tôi đã nghiên cứu tác động của việc tiêu thụ chế độ ăn dầu ngô và dầu dừa, có và không có cholesterol, với lượng tương đương của một chế độ ăn uống điển hình ở phương Tây, đến sự phân hủy LDL của con người bởi các tế bào đơn nhân ngoại vi trong khỉ Cebus albifrons. Sự phân hủy LDL ở tế bào đơn nhân thu được từ những con vật được cho ăn dầu ngô đã được cải thiện một cách đáng kể so với những con vật được cho ăn dầu dừa. Việc bổ sung cholesterol vào chế độ ăn dẫn đến sự suy giảm nhẹ sự phân hủy LDL trong nhóm dầu ngô, trong khi không có ảnh hưởng nào được ghi nhận ở nhóm dầu dừa. Các thí nghiệm kết hợp liên kết và phân hủy LDL với LDL được tách ra từ các con vật ăn chế độ dầu ngô và dầu dừa cho thấy sự tăng cường liên kết và phân hủy LDL trong các tế bào đơn nhân từ những con vật ăn chế độ dầu ngô. Sự phân hủy LDL của tế bào đơn nhân được nâng cao đi đôi với sự gia tăng hàm lượng axit béo cis không bão hòa trong tế bào, tăng cường tính linh hoạt của màng, và giảm cholesterol huyết tương. Sự gia tăng hàm lượng axit béo cis không bão hòa trong tế bào cùng với sự gia tăng tính linh hoạt của màng phản ánh hồ sơ mỡ trong chế độ ăn của động vật chủ. Một mối quan hệ tuyến tính giữa sự phân hủy LDL trong tế bào và cả hàm lượng axit béo cis không bão hòa trong tế bào cũng như tính linh hoạt của màng đã được quan sát thấy. Những quan sát này tương tự với kết quả ghi nhận trong các nghiên cứu phân hủy LDL ở động vật toàn thân với những động vật này đã được mô tả ở nơi khác. Những dữ liệu này gợi ý một cơ chế mới mà qua đó axit béo không bão hòa trong chế độ ăn thực hiện tác dụng hạ LDL của chúng.