Clinical Chemistry

Một phương pháp ước tính hàm lượng cholesterol trong phần lipoprotein có tỷ trọng thấp của huyết thanh (Sf0-20) được trình bày. Phương pháp này bao gồm các phép đo nồng độ cholesterol toàn phần trong huyết tương khi đói, triglyceride và cholesterol lipoprotein có tỷ trọng cao, không yêu cầu sử dụng thiết bị siêu ly tâm chuẩn bị. So sánh quy trình được đề xuất này với quy trình trực tiếp hơn, trong đó thiết bị siêu ly tâm được sử dụng, đã cho thấy các hệ số tương quan từ 0,94 đến 0,99, tùy thuộc vào nhóm bệnh nhân được so sánh.

Bối cảnh: Hiện nay, vẫn chưa có sự thống nhất về cách thực hiện và diễn giải các thí nghiệm PCR định lượng thời gian thực (qPCR) tốt nhất. Vấn đề càng trở nên trầm trọng hơn do thiếu chi tiết thí nghiệm đầy đủ trong nhiều ấn phẩm, gây cản trở khả năng đánh giá phê bình chất lượng của các kết quả được trình bày hoặc thực hiện lại các thí nghiệm.

Nội dung: Hướng dẫn về Thông tin Tối thiểu cho Công bố Các Thí nghiệm PCR Thời gian thực Định lượng (MIQE) nhằm vào độ tin cậy của kết quả để giúp đảm bảo tính toàn vẹn của tài liệu khoa học, thúc đẩy sự nhất quán giữa các phòng thí nghiệm, và tăng cường tính minh bạch của thí nghiệm. MIQE là một tập hợp các hướng dẫn mô tả thông tin tối thiểu cần thiết cho việc đánh giá các thí nghiệm qPCR. Bao gồm là một danh sách kiểm tra đi kèm với sự gửi ban đầu của một bản thảo đến nhà xuất bản. Bằng cách cung cấp tất cả các điều kiện thí nghiệm và đặc điểm thử nghiệm liên quan, những người đánh giá có thể đánh giá tính hợp lệ của các giao thức đã sử dụng. Cần phải tiết lộ đầy đủ tất cả các thuốc thử, trình tự, và phương pháp phân tích để các nhà nghiên cứu khác có thể tái tạo kết quả. Chi tiết MIQE nên được công bố dưới dạng rút gọn hoặc như một phụ lục trực tuyến.

Tóm tắt: Việc tuân theo các hướng dẫn này sẽ khuyến khích thực hành thí nghiệm tốt hơn, cho phép diễn giải kết quả qPCR đáng tin cậy và rõ ràng hơn.

Một phương pháp enzym học được mô tả để xác định tổng hàm lượng cholesterol trong huyết thanh bằng việc sử dụng một thuốc thử dung dịch duy nhất. Phương pháp này không yêu cầu xử lý mẫu trước và đường chuẩn hiệu chuẩn tuyến tính đến 600 mg/dl. Este cholesterol được thủy phân thành cholesterol tự do nhờ cholesterol ester hydrolase (EC 3.1.1.13). Cholesterol tự do sinh ra được oxy hóa bởi cholesterol oxidase thành cholest-4-en-3-one đồng thời sản sinh hydrogen peroxide, chất này phối hợp oxy hóa với 4-aminoantipyrine và phenol dưới sự hiện diện của peroxidase tạo thành một chất cromogen có hấp thu tối đa ở bước sóng 500 nm. Phương pháp này có thể tái thực hiện được và các kết quả tương quan tốt với những kết quả thu được bằng các quy trình tự động của Liebermann—Burchard (AA-2 và SMA 12/60) và phương pháp của Abell et al. Phương pháp hiện tại mang lại tính đặc hiệu tốt hơn so với các phương pháp trước đây và có độ chính xác vượt trội.

Phương pháp thử nghiệm cho hoạt động của superoxide dismutase (SOD, EC 1.15.1.1) này liên quan đến việc ức chế sự giảm nitroblue tetrazolium, với xanthine-xanthine oxidase được sử dụng làm nguồn sinh superoxide. Bằng cách sử dụng một chất dừng phản ứng, chúng tôi có thể xác định 40 mẫu trong vòng 55 phút. Một đơn vị hoạt động của Cu,ZnSOD có nguồn gốc từ gan bò và MnSOD có nguồn gốc từ gan gà lần lượt được xác định bằng 30 ng và 500 ng protein. Nồng độ trung bình của Cu,ZnSOD được đo bằng phương pháp này trong máu của người lớn bình thường là 242 (SEM 4) mg/L trong hồng cầu, 548 (SEM 20) microgam/L trong huyết thanh, và 173 (SEM 11) microgam/L trong huyết tương. Nồng độ Cu,ZnSOD trong huyết thanh và huyết tương của bệnh nhân bị ung thư đại tràng có xu hướng thấp hơn và cao hơn các giá trị này, nhưng không có ý nghĩa thống kê.

Các tổ hợp chất hóa học được mô tả cho phản ứng indophenol xúc tác nhằm xác định hàm lượng amoniac, tạo ra màu xanh bền. Quy trình này được điều chỉnh để xác định ure sau quá trình thủy phân với urease.

Chúng tôi mô tả một phương pháp mới để xác định triglycerides trong huyết thanh, trong đó quá trình thuỷ phân enzyme thay thế cho quy trình xà phòng hóa thường được sử dụng. Trong điều kiện thí nghiệm, sự thủy phân enzyme có thể hoàn thành trong chưa đầy 10 phút nhờ tác động kết hợp của lipase vi khuẩn và protease. Chúng tôi đã chứng minh sự thủy phân hoàn toàn của triglycerides bằng phương pháp sắc kí lớp mỏng của các sản phẩm phản ứng, bằng cách thu hồi glycerol từ huyết thanh có hàm lượng triglycerides đã biết, và bằng cách so sánh các thử nghiệm triglycerides trên một số huyết thanh được phân tích bằng phương pháp của chúng tôi với quy trình AutoAnalyzer. Quá trình thủy phân được kết hợp trực tiếp với việc xác định enzyme của glycerol, và được theo dõi thông qua sự thay đổi hấp thụ ở bước sóng 340 nm. Thử nghiệm này đơn giản, nhanh chóng và chỉ cần 50 µl hoặc ít hơn mẫu vật. Vì các enzyme được sử dụng không giải phóng glycerol từ các hợp chất khác trong huyết thanh, sự thủy phân có thể được coi là đặc hiệu cho triglycerides.

Trong quy trình đo màu trực tiếp này, triglyceride huyết thanh được thủy phân bởi lipase, và glycerol được giải phóng được phân tích trong một phản ứng xúc tác bởi glycerol kinase và L-alpha-glycerol-phosphate oxidase trong một hệ thống tạo ra hydrogen peroxide. Hydrogen peroxide được theo dõi trong sự hiện diện của horseradish peroxidase với 3,5-dichloro-2-hydroxybenzenesulfonic acid/4-aminophenazone như là hệ thống tạo màu. Độ hấp thụ cao của hệ thống chromogen này ở bước sóng 510 nm cho kết quả hữu ích với tỉ lệ thể tích mẫu/chất thử thấp chỉ 1:150, và không cần đo mẫu trắng. Một thuốc thử làm việc duy nhất, ổn định được sử dụng; phản ứng hoàn thành trong 15 phút ở nhiệt độ phòng. Đường chuẩn tuyến tính cho nồng độ triglyceride lên đến 13,6 mmol/L. Khả năng phục hồi phân tích trung bình của triglyceride trong huyết thanh là 100,1%, và các nghiên cứu về độ chính xác chạy thử-nghiệm và giữa các lần chạy thử-nghiệm cho thấy CVs lần lượt nhỏ hơn hoặc bằng 1,6 và nhỏ hơn hoặc bằng 3,0%. Phương pháp phù hợp cho tự động hóa.

Các kháng thể, lớp phân tử phổ biến nhất cung cấp nhu cầu nhận diện phân tử cho nhiều ứng dụng, đã xuất hiện hơn ba thập kỷ qua. Kết quả là, kháng thể đã đóng góp đáng kể cho sự phát triển của các thử nghiệm chẩn đoán và trở thành thiết yếu trong hầu hết các bài kiểm tra chẩn đoán được sử dụng thường xuyên trong các phòng khám hiện nay. Tuy nhiên, sự phát triển của quy trình tiến hóa hệ thống của các ligand thông qua làm giàu theo cấp số nhân (SELEX) đã cho phép tách biệt các chuỗi oligonucleotide có khả năng nhận diện gần như bất kỳ lớp phân tử mục tiêu nào với độ nhạy và đặc hiệu cao. Những chuỗi oligonucleotide này, được gọi là “aptamer”, đang bắt đầu xuất hiện như một lớp phân tử có thể cạnh tranh với kháng thể ở cả ứng dụng điều trị lẫn chẩn đoán. Aptamer khác với kháng thể, nhưng chúng mô phỏng các đặc tính của kháng thể trong nhiều định dạng chẩn đoán khác nhau. Nhu cầu về các bài kiểm tra chẩn đoán để hỗ trợ quản lý các bệnh hiện có và mới nổi đang gia tăng, và aptamer có thể đáp ứng nhu cầu nhận diện phân tử trong các bài kiểm tra đó. So với công nghệ kháng thể tiên phong, nghiên cứu về aptamer vẫn còn trong giai đoạn đầu, nhưng đang tiến triển với tốc độ nhanh chóng. Tiềm năng của aptamer có thể được nhận ra trong tương lai gần dưới hình thức các sản phẩm chẩn đoán dựa trên aptamer trên thị trường. Trong những sản phẩm như vậy, aptamer có thể đóng vai trò quan trọng, hoặc kết hợp với, hoặc thay thế cho kháng thể. Cũng có khả năng rằng các định dạng chẩn đoán hiện có sẽ thay đổi theo nhu cầu để khai thác tốt hơn các đặc tính độc đáo của aptamer.