Clinical Chemistry

A method for measuring cholesterol in 0.1 ml. of blood serum is described. This uses the saponification and extraction procedure of Abell et al. (4) and the color reaction of Zlatkis et al. (7). The procedure is shown to be accurate and reproducible. It is compared with several commonly used procedures and shown to be equal or superior to these. An adaptation of the method to filter-paper stored samples described. The method is recommended for use in clinical laboratories.

Osteocalcin nguyên vẹn của con người được tinh chế từ xương đùi cũng như các đoạn thử nghiệm của phân tử nguyên vẹn [các axit amin (aa) 1-19, 20-43, và 45-49] đã được sử dụng để tạo ra và sàng lọc các kháng thể đơn dòng (MAbs). Một phương pháp ELISA hai vị trí đã được phát triển để đo lường osteocalcin của con người trong huyết thanh bằng cách sử dụng các MAbs này. Một MAb xác định vùng giữa của osteocalcin con người (aa20-43) đã được sử dụng làm kháng thể bắt giữ, và một MAb đặc hiệu với đầu NH2 (aa7-19) gắn peroxidase đã được sử dụng để phát hiện. Osteocalcin của con người thu được từ xương đã được sử dụng để hiệu chuẩn, và tính song song đã được quan sát cho osteocalcin từ mẫu huyết thanh, các đoạn giữa NH2 (aa1-43), và osteocalcin tổng hợp của con người. Cả độ biến thiên giữa các xét nghiệm và trong xét nghiệm đều < 7%. Nồng độ osteocalcin trong huyết thanh ở phụ nữ khỏe mạnh trước mãn kinh (n = 49) là 18.3 +/- 4.2 microgam/L (trung bình +/- SD) và 28.6 +/- 9.7 microgam/L ở phụ nữ sau mãn kinh sớm (n = 114). Nồng độ huyết thanh trung bình (n = 10) giảm 10% sau 7 ngày bảo quản ở 4 độ C, trong khi nồng độ osteocalcin nguyên vẹn của con người giảm 63%. N-MID ELISA và IRMA đo lường osteocalcin nguyên vẹn của con người đã được sử dụng để theo dõi tác động của liệu pháp thay thế hormone trong một nghiên cứu hồi cứu. Một sự giảm đáng kể về nồng độ trước mãn kinh chỉ được phát hiện trong N-MID ELISA.

Background: Apolipoprotein AI (ApoAI) and ApoB are risk indicators of cardiovascular disease. We describe the use of immunoresonance scattering to measure the ApoAI and ApoB in serum.

Methods: We used a trisodium citrate method to prepare 9.0-nm gold nanoparticles labeled with goat anti-human ApoAI and ApoB antibodies. The immune reaction between gold-labeled antibodies and antigens took place in Na2HPO4-NaH2PO4 buffer solution (pH 6.4 for ApoAI and pH 6.0 for ApoB) in the presence of 75 g/L polyethylene glycol (PEG). We used a transmission electron microscope to observe the shape of the gold nanoparticles. Results were compared with those obtained by immunoturbidimetric methods. Twenty-five human serum samples were assayed by the immunoresonance scattering assay preset with the data indicated and by an immunoturbidimetric assay.

Results: The presence of PEG greatly enhanced the intensity of resonance-scattering peaks at 560 nm. The intensity (ΔI) was proportional to concentration at 0.00833–0.3333 mg/L ApoAI and 0.00197–0.1972 mg/L ApoB. The detection limits were 2.04 and 0.96 μg/L for ApoAI and ApoB, respectively. The results for human serum samples were in agreement with those obtained with an immunoturbidimetric method. Linear regression analysis revealed a correlation coefficient, slope, and intercept of 0.915, 0.966, and 68.53 mg/L, respectively, for ApoAI and 0.919, 0.996, and 15.46 mg/L for ApoB.

Conclusion: This method showed high sensitivity and good selectivity for quantitative determination of ApoAI and ApoB in human serum, with satisfactory results.

Atomic absorption spectrophotometry was evaluated as a method for the determination of calcium and magnesium in serum, urine, diet, and stool, and was found a most suitable technic for a large clinical chemistry laboratory.

This interlaboratory study on determination of 25-hydroxyvitamin D (25-OH-D) in serum involved 15 laboratories in eight European countries. All could distinguish between normal (50 +/- 31 nmol/L, mean +/- SD) and grossly increased concentrations, but for eight laboratories the results for serum samples with low and normal 25-OH-D content overlapped. In general, values were well reproducible, but interlaboratory variation in 25-OH-D measurement was large, 24,25(OH)2D3 interfering in most of the assays. We present evidence in favor of chromatography before assay, as opposed to nonchromatographic methods. Liquid chromatography with ultraviolet detection for quantifying 25-OH-D2 and 25-OH-D3 appears to be an appropriate reference method, whereas competitive protein binding assay is the method of choice for routine determinations. Control sera with subnormal, normal, and above-normal concentrations of 25-OH-D3 are needed for use in standardization of 25-OH-D assays.

An international 19-laboratory survey was organized to compare assays for 25-hydroxyvitamin D, 24,25-dihydroxyvitamin D, and 1,25-dihydroxyvitamin D in plasma. Each participant received two ethanolic standard solutions of each metabolite and eight plasma samples. Each laboratory used its usual procedures. Mean interlaboratory coefficients of variation (CVs) for the eight plasma samples were 35%, 43%, and 52% for 25-hydroxyvitamin D, 24,25-dihydroxyvitamin D, and 1,25-dihydroxyvitamin D, respectively. Average CVs for the standard solutions were 27%, 23%, and 25%, respectively. Of the eight plasma samples, five had the same concentration for one of the metabolites. One sample was diluted to 0.6 times its original concentration and three samples were fortified with one or more of the metabolites under investigation. Fourteen of 18 laboratories (78%) could distinguish between the five unchanged samples and the modified ones with their 25-hydroxyvitamin D assay. Nine of 12 (75%) could distinguish the modified samples from the other samples with the 24,25-dihydroxyvitamin D assay. Only eight of 15 (53%) could do this their 1,25-dihydroxyvitamin D assay. Values from different laboratories evidently cannot be intercompared without making an actual comparison of the assay procedures. Furthermore, in case of clinical applications of these assays, each laboratory should establish its own reference values and should continually use an internal reference sample to assess the precision of the procedures.

Nền tảng: Hệ thống đo lường tham chiếu của IFCC cho hemoglobin (Hb)A1c (IFCC-RM) đã được phát triển trong khuôn khổ truy nguyên định lượng và được tích hợp trong mạng lưới 14 phòng thí nghiệm tham chiếu. Bài báo này mô tả kết quả của 12 nghiên cứu so sánh (các đánh giá định kỳ để kiểm soát các yếu tố thiết yếu của IFCC-RM).

Phương pháp: Mỗi nghiên cứu bao gồm: các mẫu không xác định (để kiểm tra các phòng thí nghiệm trong mạng lưới); các mẫu đã biết (kiểm soát); các chất chuẩn mới sản xuất (để kiểm tra giá trị gán tính toán); các chất chuẩn được lưu trữ (để kiểm tra độ ổn định) và một bộ chuẩn (để hiệu chuẩn IFCC-RM). Các mẫu không xác định được đo bằng cách sử dụng IFCC-RM và các phương pháp so sánh được lựa chọn [DCMs; Chương trình tiêu chuẩn hóa Glycohemoglobin Quốc gia (NGSP) tại Hoa Kỳ, Hiệp hội Đái tháo đường Nhật Bản/Hiệp hội Hóa sinh Lâm sàng Nhật Bản (JDS/JSCC) tại Nhật Bản và Mono-S tại Thụy Điển] được sử dụng để điều tra độ ổn định của Phương trình Master (ME), mối quan hệ giữa IFCC-RM và DCMs.

Kết quả: Tổng cộng có 105 bộ dữ liệu IFCC-RM đã được đánh giá: 95 được chấp thuận, 5 không được chấp thuận, và 5 không có dữ liệu nào được nộp. Phân tích xu hướng của các ME, thể hiện dưới dạng thay đổi phần trăm HbA1c mỗi năm, cho thấy 0,000% (NGSP, không có ý nghĩa), -0,030% (JDS/JSCC; có ý nghĩa) và -0,016% (Mono-S; không có ý nghĩa). Đánh giá hiệu suất lâu dài cho thấy không có thay đổi hệ thống theo thời gian; 2 phòng thí nghiệm cho thấy độ thiên lệch đáng kể, 1 phòng thí nghiệm có độ tái sản xuất kém. Giá trị trung bình HbA1c được xác định bởi các phòng thí nghiệm thực hiện phổ khối (MS) là giống nhau với giá trị trung bình do các phòng thí nghiệm sử dụng điện di mao quản (CE) xác định, nhưng độ tái sản xuất tại các phòng thí nghiệm sử dụng CE tốt hơn. Một lô chất chuẩn mới không được phê duyệt. Tất cả các chất chuẩn lưu trữ đều ổn định.

Kết luận: Một hệ thống tham chiếu vững chắc đã được thiết lập để đảm bảo tính liên tục và độ ổn định của neo phân tích cho HbA1c.

Urinary acidic and alcoholic catecholamine metabolites were isolated separately from 24-h urines by simple extraction procedures. After derivatization, extracts were analyzed by means of simultaneous gas chromatography on two different stationary phases. The quality of the assay was checked by running "normal" and enriched commercial (Hyland) control urines in each series. Normal values are given for vanilmandelic acid, homovanillic acid, and 3-methoxy-4-hydroxyphenylethylene glycol, expressed as a function of age. We present excretion patterns showing these metabolites and also 3,4-dihydroxyphenylacetic acid, vanillacetic acid, 3,4-dihydroxyphenylethylene glycol, and vanilethanol for 12 patients with neurogenic tumors. Values obtained for vanilmandelic acid by this method correlate well with those obtained by the electrophoretic/colorimetric method of Hermann [Am. J. Clin. Pathol. 41, 373 (1964)].

Plasma nitrite and nitrate determinations are increasingly being used in clinical chemistry as markers for the activity of nitric oxide synthase and the production of nitric oxide radicals. However, a systematic evaluation of the determination of nitrite and nitrate in plasma has not been performed. In this study the recovery and stability of nitrite and nitrate in whole blood and in plasma, the relation between nitrite and nitrate concentrations in plasma, and possible sources of artifacts were investigated. The main conclusions are: (a) Recovery of nitrite and nitrate from plasma is near-quantitative (87%) and reproducible; (b) nitrite and nitrate are stable in (frozen) plasma for at least 1 year; (c) nitrite in whole blood is very rapidly (&gt; 95% in 1 h) oxidized to nitrate, and therefore plasma nitrite determination alone is meaningless; (d) the ranges of nitrite and nitrate concentrations in plasma samples of 26 healthy persons are 1.3-13 mumol/L (mean 4.2 mumol/L) and 4.0-45.3 mumol/L (mean 19.7 mumol/L), respectively; (e) plasma nitrite and nitrate concentrations were not correlated (nitrite as % of total nitrite + nitrate varied from 3.9% to 88% in plasma samples); and (f) plasma samples should be deproteinized, and background controls for each sample should be included in the assay, to avoid measuring artifactually high nitrite and nitrate concentrations in plasma.