Journal of Separation Science

Theanine is a unique non‐protein amino acid found in tea (Camellia sinensis). It contributes to the favourable umami taste of tea and is linked to various beneficial effects in humans. There is an increasing interest in theanine as an important component of tea, as an ingredient for novel functional foods and as a dietary supplement. Therefore, optimal conditions for extracting theanine from tea are required for the accurate quantification of theanine in tea and as an efficient first step for its purification. This study examined the effects of four different extraction conditions on the yield of theanine from green tea using water and applied response surface methodology to further optimise the extraction conditions. The results showed that temperature, extraction time, ratio of water‐to‐tea and tea particle sizes had significant impacts on the extraction yield of theanine. The optimal conditions for extracting theanine from green tea using water were found to be extraction at 80°C for 30 min with a water‐to‐tea ratio of 20:1 mL/g and a tea particle size of 0.5–1 mm.

An analytical method based on an optimized solid‐phase extraction procedure and followed by high‐performance liquid chromatography (HPLC) separation with diode array detection was developed and validated for the simultaneous determination of phenolic acids (gallic, protocatechuic, 4‐hydroxy‐benzoic, vanillic, caffeic, syringic, p‐coumaric, ferulic, sinapic, and cinnamic acids), flavanols (catechin and epicatechin), flavonols (myricetin, quercetin, kaempferol, quercetin‐3‐O‐glucoside, hyperoside, and rutin), flavones (luteolin and apigenin) and flavanones (naringenin and hesperidin) in rice flour (Oryza sativa L.). Chromatographic separation was carried out on a PerfectSil Target ODS‐3 (250 mm × 4.6 mm, 3 μm) column at temperature 25°C using a mobile phase, consisting of 0.5% (v/v) acetic acid in water, methanol, and acetonitrile at a flow rate 1 mL min⁻¹, under gradient elution conditions. Application of optimum extraction conditions, elaborated on both Lichrolut C₁₈ and Oasis HLB cartridges, have led to extraction of phenolic acids and flavonoids from rice flour with mean recoveries 84.3–113.0%. The developed method was validated in terms of linearity, accuracy, precision, stability, and sensitivity. Repeatability (n = 5) and inter‐day precision (n = 4) revealed relative standard deviation (RSD) <13%. The optimized method was successfully applied to the analysis of phenolic acids and flavonoids in pigmented (red and black rice) and non‐pigmented rice (brown rice) samples.

Sự phân tách enantiomer của một số dẫn xuất phenothiazine và benzodiazepine đã được nghiên cứu trên sáu pha tĩnh chiral (CSPs) khác nhau trong HPLC. Các CSP được chọn, phụ thuộc vào cấu trúc của các hợp chất được phân tách, có thể dựa trên các tác nhân chiral β‐cyclodextrin - β‐cyclodextrin không thay thế và β‐cyclodextrin ether hydroxypropyl, hoặc dựa trên kháng sinh đại phân tử - vancomycin, teicoplanin, aglycone teicoplanin và ristocetin A. Các phép đo được thực hiện trong chế độ phân tách pha đảo. Ảnh hưởng của thành phần pha di động lên khả năng giữ lại và phân tách enantiomer đã được nghiên cứu. Benzodiazepine có thể được phân tách enantiomer gần như với tất cả các pha tĩnh chiral được sử dụng, ngoại trừ CSP liên kết với vancomycin. Sự kết hợp đỉnh của oxazepam và lorazepam đã được quan sát nếu sự phân tách được thực hiện ở nhiệt độ phòng thí nghiệm. Nhiệt độ giảm cần thiết trong một số trường hợp để tránh sự racemization trên cột. Hệ thống phân tách gồm CSP liên kết với teicoplanin và các pha di động đệm-metanol hoặc metanol tinh khiết đã được chứng minh là phù hợp ngay cả cho các mục đích chuẩn bị do giá trị độ phân giải cao của các enantiomer. Sự phân tách enantiomer của các dẫn xuất phenothiazine khó đạt được hơn nhưng vẫn thành công, ít nhất một phần, với cả hai loại CSP được sử dụng (trừ levomepromazine).

Phương pháp sắc ký đảo ngược tốc độ cao (HSCCC) đã được áp dụng để tinh chế ba glycosid flavonoid từ phần trên mặt đất của Taraxacum mongolicum, một loại thuốc truyền thống của Trung Quốc. Các phân tích tiếp theo bằng UV, MS và NMR đã dẫn đến việc xác định ba glycosid flavonoid bao gồm hai hợp chất mới là isoetin‐7‐O‐β‐D‐glucopyranosyl‐2′‐O‐α‐L‐arabinopyranoside và isoetin‐7‐O‐β‐D‐glucopyranosyl‐2′‐O‐α‐D‐glucopyranoside, cùng với một hợp chất đã biết, isoetin‐7‐O‐β‐D‐glucopyranosyl‐2′‐O‐α‐D‐xyloypyranoside, lần đầu tiên được tách chiết từ T. mongolicum. Hệ thống dung môi hai pha bao gồm ethyl acetate/n‐butanol/nước (2:1:3, v/v/v) đã được thực hiện trong HSCCC. Kết quả, tổng cộng có 25,7 mg isoetin‐7‐O‐β‐D‐glucopyranosyl‐2′‐O‐α‐L‐arabinopyranoside, 19,1 mg isoetin‐7‐O‐β‐D‐glucopyranosyl‐2′‐O‐α‐D‐glucopyranoside, và 10,6 mg isoetin‐7‐O‐β‐D‐glucopyranosyl‐2′‐O‐α‐D‐xyloypyranoside đã được thu được với độ tinh khiết lần lượt là 98,7%, 98,3% và 99,1%, theo phương pháp HPLC từ 500 mg chiết xuất giàu sau khi làm sạch bằng nhựa polyamide.

Các limonoid được coi là những tác nhân tiềm năng trong việc phòng ngừa ung thư và được phân bố rộng rãi trong chi Citrus dưới dạng aglycone và glucoside. Trong nghiên cứu hiện tại, phương pháp HPLC đảo ngược kết hợp với phổ khối lượng CID đã được phát triển để phân tách và xác định đồng thời các aglycone và glucoside từ limonoid có trong trái cây họ cam quýt. Năm aglycone như limonin, deacetyl nomilin, ichangin, axit isolimonoic và nomilin đã được xác định qua phổ khối lượng ion dương CID MS/MS, trong khi năm glucoside, bao gồm: limonin glucoside, isoobacunoic acid glucoside, obacunone glucoside, deacetyl nomilinic acid glucoside và nomilinic acid glucoside được phân tích qua phổ khối lượng ion âm CID. Phương pháp đã phát triển được áp dụng thành công cho các mẫu trái cây họ cam quýt phức tạp để phân tách và xác định các aglycone và glucoside. Hạt cam quýt được chiết xuất bằng methanol và được tinh chế một phần, sau đó phân tích bằng phổ khối lượng LC-CID. Việc phân tách được thực hiện bằng cột C-18; tám loại limonoid đã được xác định bằng cách so sánh thời gian lưu và sự phân mảnh phổ khối lượng. Theo như chúng tôi biết, đây là báo cáo đầu tiên về việc xác định các limonoid trong trái cây họ cam quýt bằng kỹ thuật CID.

Trong bài viết này, một phương pháp chiết tách pha rắn phân tán dựa trên việc sử dụng ống nanotube carbon đa thành đã được phát triển để xác định 15 loại dư lượng thuốc trừ sâu phospho hữu cơ, bao gồm một số chất chuyển hóa của chúng (disulfoton sulfoxide, ethoprophos, cadusafos, dimethoate, terbufos, disulfoton, chlorpyrifos-methyl, malaoxon, fenitrothion, pirimiphos-methyl, malathion, chlorpyrifos, terbufos sulfone, disulfoton sulfone, và fensulfothion) trong mẫu nước môi trường thực tế (nước chảy, nước khoáng và nước máy) bằng kỹ thuật GC với phát hiện ni tơ phospho. Các yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất làm giàu như thể tích mẫu, số lượng ống nanotube carbon đa thành và thể tích dung dịch eluent đã được nghiên cứu. Phương pháp tối ưu đã được xác minh dựa trên việc hiệu chuẩn tương thích ma trận, độ thu hồi, độ chính xác và độ tin cậy cho ba mẫu phân tích. Trong trường hợp cuối cùng, bài kiểm tra Student’s t phát triển đã chứng minh rằng không có sự khác biệt đáng kể giữa nồng độ thực tế và nồng độ được bổ sung. Điều kiện chiết tách pha rắn phân tán tối ưu (chiết 200 mL nước, pH 6.0, với 130 mg ống nanotube carbon đa thành, eluent bằng 25 mL dichloromethane cho nước chảy và nước máy và 30 mL cho nước khoáng) cho phép chiết xuất định lượng các chất phân tích ở mức thấp hơn giới hạn tối đa dư lượng được quy định bởi Liên minh Châu Âu, với LOD giao động từ 1.16 đến 93.6 ng/L. Giá trị thu hồi tuyệt đối đạt được nằm trong khoảng 67–107% (giá trị RSD <10.1%).

Trà là nguồn chính của catechin, một hợp chất đã trở nên nổi tiếng nhờ khả năng chống oxy hóa. Nhiều nghiên cứu trên người, động vật và in vitro đã liên kết catechin trong trà với việc ngăn ngừa một số loại ung thư, giảm nguy cơ béo phì, tiểu đường và bệnh tim mạch, cũng như cải thiện hệ thống miễn dịch. Các catechin trong trà được sử dụng rộng rãi trong nhiều sản phẩm dược phẩm, thực phẩm chức năng và mỹ phẩm để nâng cao tuổi thọ sản phẩm hoặc cải thiện sức khỏe con người. Do đó, nhu cầu về catechin đã tăng lên đáng kể. Catechin đã được chiết xuất và tách riêng từ lá trà bằng nhiều phương pháp qua một số bước khác nhau bao gồm: xử lý lá trà, chiết xuất catechin từ trà vào dung môi, tách isolat catechin khỏi các thành phần khác đã được chiết xuất, và sấy khô các chế phẩm để thu được chiết xuất catechin dưới dạng bột. Bài báo này tóm tắt các đặc điểm vật lý và hóa học của catechin trà và xem xét các bước chiết xuất trong các phương pháp chiết xuất khác nhau, như một cơ sở để cải thiện và phát triển thêm quy trình chiết xuất và tách isolat catechin trà.

Sáu yếu tố khác nhau liên quan đến quá trình chiết xuất catechin từ trà xanh bằng nước đã được xem xét để đánh giá tác động của chúng đến sản lượng catechin và hiệu quả sử dụng nước. Tổ hợp nhiệt độ và thời gian tốt nhất cho việc chiết xuất catechin là ở 80°C trong 30 phút. Sản lượng catechin cũng tối ưu với kích thước hạt trà là 1 mm, độ pH của dung dịch pha chế <6 và tỷ lệ trà-so nước là 50:1 (mL/g). Về hiệu quả sử dụng nước trong một lần chiết xuất, tỷ lệ nước-so trà là 20:1 (mL/g) cho kết quả tốt nhất; lượng nước sử dụng giảm đi 2,5 lần cho mỗi gram trà xanh. Tại tỷ lệ nước-so trà 20:1 mL/g, sản lượng catechin cao nhất trên mỗi gram trà xanh đạt được bằng cách chiết xuất cùng một mẫu trà xanh hai lần. Tuy nhiên, để sử dụng nước hiệu quả nhất, phương pháp chiết xuất tốt nhất được tìm thấy là một lần ở tỷ lệ nước-so trà 12:1 (mL/g) và một lần ở tỷ lệ nước-so trà 8:1 (mL/g). Do đó, tất cả sáu yếu tố được nghiên cứu đều có tác động đến sản lượng catechin được chiết xuất từ trà xanh bằng nước và hai trong số đó có tác động đến hiệu quả sử dụng nước.

Bài tổng quan này ngắn gọn mô tả một số điểm nổi bật về tình trạng hiện tại của tri thức liên quan đến peptidoma nước bọt. Nó phác thảo các khó khăn nội tại trong việc xác định nó liên quan đến các yếu tố biến đổi khác nhau, chẳng hạn như: i) đa hình di truyền cao, được phức tạp bởi các sự chèn/xóa cá nhân và việc cắt ghép thay thế; ii) sự trưởng thành sau dịch mã phức tạp bao gồm các cắt đứt proteolytic khác nhau, gắn đường, phosphoryl hóa và quá trình sulf hóa; iii) sự biến thiên sinh lý và các đóng góp khác nhau cho tổng thể. Hơn nữa, một số vấn đề công nghệ và phân tích cũng như những cạm bẫy phải vượt qua trong quá trình nghiên cứu của chúng tôi tập trung vào việc xác định phẩm chất và số lượng rộng rãi của peptidoma nước bọt, chủ yếu dựa trên phân tích LC-MS của các peptide tự nhiên còn nguyên vẹn, cũng được mô tả ở đây. Hy vọng rằng thông tin được cung cấp có thể hữu ích cho các nhóm khác tham gia vào việc phân tích nước bọt hoặc các dịch thể cơ thể khác cho các ứng dụng lâm sàng.

Các nền tảng proteom cho phép các nhà nghiên cứu phân tích một số lượng lớn protein qua nhiều bộ mẫu phức tạp cho thấy tiềm năng lớn trong việc phát hiện biomarker. Các phương pháp dựa trên LC-MS/MS có thể được sử dụng để phân tích nhiều mẫu mà không cần phải gắn nhãn protein. Vì phân tích là một quá trình tuần tự, hiệu suất của hệ thống cần phải nhất quán trong suốt toàn bộ thí nghiệm. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã sử dụng một bộ mẫu huyết thanh spiked cũng như một bộ 55 mẫu huyết thanh lâm sàng từ các bệnh nhân tâm thần phân liệt và tình nguyện viên khỏe mạnh để chỉ ra rằng phương pháp proteom không gắn nhãn cung cấp kết quả tái lập được qua một số lượng mẫu lớn và có thể được sử dụng để đo lường chính xác độ phong phú tương đối của protein. Sử dụng phương pháp này, chúng tôi đã xác định 1709 protein huyết thanh bao phủ một phạm vi động hơn ba bậc độ lớn. Chúng tôi tin rằng proteomics định lượng không gắn nhãn đặc biệt phù hợp cho việc phát hiện biomarker trong các bộ mẫu lớn.