Experimental Dermatology

Tóm tắt: Khả năng của tế bào mô bì nang lông ở người trưởng thành tham gia vào việc khởi phát và tái tạo nang lông mới, cũng như kích thích phản ứng từ các đối tác biểu mô đa dạng, cho thấy một mức độ phát triển độc đáo và ảnh hưởng vượt xa tế bào sợi liên nang. Chúng tôi gần đây đã đề xuất rằng tế bào mô bì nang lông ở người trưởng thành có các hoạt động của tế bào gốc hoặc tế bào tiền thân phong phú, bao gồm một vai trò quan trọng trong việc chữa lành vết thương ở mô bì da. Với việc đến nay các sản phẩm da nhân tạo vẫn còn nhiều khiếm khuyết, bao gồm sự vắng mặt của nang lông, chúng tôi đã nghiên cứu khả năng của tế bào mô bì nang lông được đưa vào trong các vết thương da; hình thành nang lông trong môi trường vết thương; và tạo ra một sản phẩm da từ nang lông. Trong nghiên cứu của chúng tôi, chúng tôi đã cấy ghép tế bào mô bì nang lông của chuột, được đánh dấu bằng thuốc nhuộm sinh học, vào các vết thương ở tai và cơ thể. Chúng tôi phát hiện rằng chúng được đưa vào lớp bì mới theo cách tương tự như tế bào sợi da, nhưng lớp bao nang lông thấp hơn cũng hòa nhập vào nang lông. Bằng cách sử dụng các tổ hợp khác nhau của tế bào mô bì nang lông và tế bào biểu mô lớp bao ngoài trong các vết thương lấy mẫu, chúng tôi đã chứng minh rằng các nang lông mới chỉ được hình thành khi có sự tham gia của các nhú bì nguyên vẹn. Cuối cùng, bằng cách kết hợp tế bào lớp bao nang lông và tế bào lớp bao ngoài trong các buồng tổ chức, chúng tôi đã tạo ra một sản phẩm da có cấu trúc bì và biểu bì đặc trưng cùng với màng đáy bình thường – đây là sản phẩm da đầu tiên được sản xuất hoàn toàn từ tế bào nang lông. Dữ liệu này hỗ trợ giả thuyết rằng tế bào mô bì nang lông có thể đóng vai trò quan trọng trong việc chữa lành vết thương và thể hiện tiềm năng hữu ích của chúng trong các sản phẩm da và chất thay thế da cho con người. Trong khi chúng tôi đã đạt được tiến bộ hướng tới việc sản xuất các sản phẩm da chứa nang lông, chúng tôi cho rằng sự thất bại của các tế bào nhú bì nuôi cấy trong việc kích thích hình thành nang lông trong các vết thương minh họa vai trò phức tạp mà mô bì nang lông có thể đóng góp trong da. Chúng tôi tin rằng điều này cho thấy một sự phân lập thật sự về hoạt động của các tế bào nang lông trong da.

Abstract: Recently, decreased interferon ‐ γ (IFN‐γ) and increased interleukin (IL)‐4 production have been reported in measurements of the content of the cytokines in culture supernatants of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) obtained from patients with atopic dermatitis (AD). These data suggest deviation of PBMC into Th₂‐reactive cells in AD. In the present study, we examined the frequency of IL‐2‐, IL‐4‐, and IFN‐γ‐ producing cells in PBMC with flow cytometry. PBMC from 16 patients with AD and 18 healthy controls were stimulated for 2 days with anti‐CD3 and IL‐2, and further cultured for 4 days with a maintenance dose of IL‐ 2. Thereafter these cells were restimulated with phorbol 12‐myristate 13‐ acetate (PMA) and ionomycin for 4 h in the presence of monensin. After fixation of the cells, the cell membranes were made permeable and intracellular cytokines were stained with anti‐IL‐2, anti‐IL‐4 or anti‐IFN‐γ antibody. Cytokine‐producing cells were analyzed by gating CD4⁺ ‐ or CD8⁺ ‐subsets. Thus counted frequency of IFN‐γ‐producing cells was significantly decreased in CD4⁺ subsets of AD patients (9.9±7.4%) when compared with that in the controls (20.0±6.7%). There was no significant difference either in the frequency of IL‐2‐ or IL‐4‐producing CD4⁺ subsets or in that of CD8⁺ subsets. Furthermore, in the enzyme‐linked immunosorbent assay, we also found a decreased production of IFN‐γ in the culture of PBMC from AD patients, when compared with those from healthy controls, although it was only at a marginally significant level (P= 0.07). Again there was no increase in IL‐4 concentration in AD patients. In addition, we found a weak negative relationship between the disease severity and the frequency of these cells. These results suggest that the decreased frequency of IFN‐γ‐producing CD4⁺ cells with subsequently decreased production of IFN‐γ play a crucial role in the pathophysiology of AD.

Tóm tắt:  Proanthocyanidin từ hạt nho (GSPs) trong chế độ ăn uống ngăn ngừa quá trình photocarcinogenesis ở chuột. Ở đây, chúng tôi báo cáo rằng việc điều trị in vitro tế bào carcinoma biểu mô người A431 bằng GSPs đã ức chế sự phát triển tế bào (13–89%) và kích thích cái chết tế bào (1–48%) theo liều (5–100 μg/ml) và thời gian (24, 48 và 72 giờ). Việc ức chế sự phát triển tế bào do GSP gây ra có liên quan đến việc gia tăng sự ngăn chặn ở pha G1 tại 24 giờ, điều này được môi giới thông qua việc ức chế các kinase phụ thuộc cyclin (Cdk) Cdk2, Cdk4, Cdk6 và các cyclin D1, D2 và E, đồng thời gia tăng sự biểu hiện protein của các chất ức chế kinase phụ thuộc cyclin (Cdki), Cip1/p21 và Kip1/p27, cũng như tăng cường sự liên kết của Cdki-Cdk. Việc điều trị tế bào A431 bằng GSPs (20–80 μg/ml) dẫn đến sự gia tăng cái chết tế bào apoptotic theo liều (26–58%), điều này có liên quan đến sự gia tăng biểu hiện protein của Bax proapoptotic, giảm biểu hiện của Bcl-2 và Bcl-xl, mất mát tiềm năng màng ty thể, và sự cắt đứt của caspase-9, caspase-3 và PARP. Việc tiền điều trị bằng chất ức chế pan-caspase (z-VAD-fmk) đã chặn đứng quá trình apoptosis do GSP gây ra trong các tế bào A431, gợi ý rằng apoptosis do GSP gây ra chủ yếu liên quan đến con đường phụ thuộc caspase-3. Tóm lại, nghiên cứu của chúng tôi cho thấy GSPs có tiềm năng hóa trị liệu chống lại tế bào carcinoma biểu mô người in vitro, cần có thêm nghiên cứu cơ chế in vivo để xác minh hiệu ứng hóa trị liệu của GSPs trong các loại ung thư da.

Tóm tắt:  Yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu (VEGF) được sản xuất liên tục bởi tế bào keratinocyte, nhưng chưa xác định được tế bào mục tiêu ở thượng bì. Chúng tôi báo cáo rằng tế bào hắc tố người bình thường (Mc) được duy trì trong môi trường không có huyết tương, bổ sung hormone và yếu tố tăng trưởng mà không có ester phorbol và choleragen, diễn ra việc biểu hiện liên tục thụ thể VEGF-1 (VEGFR-1), VEGFR-2 và neuropilin-1. Hơn nữa, việc kích thích Mc bằng isoform VEGF₁₆₅ dẫn đến sự phosphoryl hóa của VEGFR-2, thụ thể chịu trách nhiệm cho hầu hết các tác động của VEGF trên các tế bào nội mô, cho thấy thụ thể này có chức năng. Thú vị là, trong Mc, sự biểu hiện VEGFR-2 được kích thích bởi bức xạ cực tím và bị giảm đi bởi VEGF và yếu tố hoại tử khối u-α. Việc nuôi cấy kéo dài (>8 tuần) có mặt của ester phorbol làm mất đi sự biểu hiện của VEGFR-2, giải thích các báo cáo trước đó rằng Mc không biểu hiện VEGFR-1 và VEGFR-2. Những dữ liệu này gợi ý rằng VEGF có thể đóng một vai trò trong hành vi của Mc trong da.

Tóm tắt: Phân giải protein cụ thể đóng vai trò quan trọng trong sự biệt hóa cuối cùng của keratinocytes trong biểu bì và nhiều loại protease đã được liên quan đến quá trình này. Proprotein convertase (PCs) là một gia đình của các serine protease phụ thuộc Ca²⁺, tham gia vào việc xử lý và kích hoạt nhiều loại cơ chất. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã xem xét biểu hiện và một số cơ chất tiềm năng của PCs trong biểu bì. Bốn PCs được biểu hiện trong biểu bì: furin, PACE4, PC5/6 và PC7/8. Furin được phát hiện dưới hai dạng, có hoặc không có miền xuyên màng, cho thấy sự xảy ra của cắt sau dịch mã để sản xuất enzyme hòa tan. Ngoài ra, vị trí hoạt động của furin có khả năng tiếp cận khác nhau trong lớp hạt của biểu bì so với lớp đáy, trong khi kháng thể đối với miền xuyên màng nhuộm cả hai lớp. Những phát hiện này gợi ý rằng furin có khả năng tiếp cận các loại cơ chất khác nhau trong tế bào hạt so với tế bào đáy. Ngược lại, PC7/8 được phát hiện khắp biểu bì với kháng thể đối với cả miền xuyên màng và vị trí hoạt động mà không có dạng hòa tan nào được quan sát thấy. Một chất ức chế peptide PC (dec‐RVKR‐CMK) ức chế sự cắt của Notch‐1, một thụ thể quan trọng trong việc xác định số phận tế bào, được tìm thấy trong toàn bộ biểu bì. Profilaggrin, có trong lớp hạt, được cắt cụ thể bởi furin và PACE4 in vitro tại một vị trí giữa đầu amino và chuỗi filaggrin đầu tiên. Công trình này gợi ý rằng các PCs đóng nhiều vai trò trong quá trình biệt hóa biểu bì.

Tóm tắt:  Keloid là một rối loạn fibroproliferative ở da đặc trưng bởi sự lắng đọng quá mức các thành phần của ma trận ngoại bào (ECM) như collagen, glycoprotein và fibronectin. Mục tiêu của rapamycin ở động vật có vú (mTOR) là một loại kinase serine/threonine, đóng vai trò quan trọng trong việc điều tiết các quá trình chuyển hóa và tỷ lệ tổng hợp. Các báo cáo công bố đã chỉ ra rằng mTOR là một yếu tố điều tiết sự biểu hiện collagen, và việc ức chế nó làm giảm sự lắng đọng ECM. Mục tiêu của chúng tôi là điều tra vai trò của mTOR trong sinh bệnh học của keloid và nghiên cứu tác động của rapamycin lên sự biểu hiện của kháng thể nhân tế bào đang tăng sinh (PCNA), cyclin D1, collagen, fibronectin và alpha‐smooth muscle actin (α‐SMA) trong các fibroblast bình thường (NF) và fibroblast keloid (KF). Các chiết xuất mô thu được từ sẹo keloid cho thấy sự biểu hiện mTOR, kinase S6 p70KDa (p70S6K) và các dạng hoạt hóa tương ứng tăng cao, gợi ý một trạng thái kích hoạt trong các sẹo keloid. Sự kích thích từ huyết tương làm nổi bật sự nhạy cảm gia tăng của KF đối với các yếu tố tăng sinh và tầm quan trọng của mTOR và p70S6K trong giai đoạn đầu của quá trình lành vết thương. Việc áp dụng rapamycin vào các NF và KF đơn bào đã giảm biểu hiện dần dần của PCNA trong tế bào chất, cyclin D1, fibronectin, collagen và α‐SMA, thể hiện tác động chống tăng sinh và tiềm năng điều trị của rapamycin trong việc điều trị các sẹo keloid. Tác động ức chế của rapamycin được phát hiện là có thể hồi phục sau khi các protein biểu hiện hồi phục trở lại sau khi loại bỏ rapamycin khỏi môi trường nuôi cấy. Những kết quả này thể hiện vai trò quan trọng của mTOR trong việc điều tiết chu kỳ tế bào và sự biểu hiện của các protein ECM: fibronectin, collagen và α‐SMA.

Tóm tắt:  Các sản phẩm cuối gluco hóa tiên tiến (AGEs) có tác động khác nhau đến cơ chế bệnh sinh của các biến chứng tiểu đường. Việc biểu hiện quá mức của matrix metalloproteinases‐9 (MMP‐9) có hại cho quá trình chữa lành vết thương trên da trong bối cảnh bệnh tiểu đường. Tuy nhiên, tác động của AGEs lên việc gia tăng MMP‐9 ở các tế bào da và các cơ chế phân tử chính xác liên quan vẫn chưa được hiểu rõ. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã điều tra tác động của AGEs lên sự sản xuất MMP‐9 ở các keratinocytes HaCaT và đặc trưng hóa các con đường truyền tín hiệu mà AGEs kích hoạt liên quan đến việc điều chỉnh MMP‐9. Chúng tôi đã chứng minh rằng AGE–BSA làm tăng biểu hiện MMP‐9 ở các tế bào HaCaT cả ở mức protein và mRNA. Hiệu ứng kích thích của AGE–BSA đối với MMP‐9 bị giảm bớt bởi các chất ức chế kinase được điều chỉnh bởi tín hiệu ngoại bào (ERK1/2, U0126), kinase điều hòa bởi tác nhân gây tăng trưởng p38 (MAPK, SB203580) và NF‐κB, nhưng không phải c‐Jun N‐terminal kinase. Hơn nữa, thụ thể cho các sản phẩm cuối gluco hóa tiên tiến (RAGE) được biểu hiện trong các keratinocytes, và việc nuôi cấy với AGE–BSA dẫn đến sự gia tăng biểu hiện RAGE đáng kể theo liều. Việc làm im lặng gen RAGE ngăn chặn sự kích hoạt MMP‐9 do AGE–BSA gây ra và sự phosphoryl hóa của ERK1/2 và p38 MAPK. Chúng tôi cũng quan sát thấy sự tham gia của NF‐κB trong việc kích hoạt MMP‐9 do AGE–BSA gây ra, điều này không bị ngăn chặn bởi U0126 và SB203580. Các kết quả này gợi ý rằng AGEs có thể đóng một vai trò quan trọng trong việc suy yếu khả năng chữa lành vết thương tiểu đường bằng cách gia tăng biểu hiện MMP‐9 ở các keratinocytes thông qua các con đường RAGE, ERK1/2 và p38 MAPK; sự kích hoạt của NF‐κB cũng liên quan trong quá trình này. Những con đường này có thể đại diện cho các mục tiêu tiềm năng cho các can thiệp dược phẩm nhằm cải thiện khả năng chữa lành vết thương tiểu đường, một quá trình mà MMP‐9 đóng vai trò quan trọng.

Tóm tắt Hai mươi lăm mẫu dịch tiết vết loét chân từ 17 bệnh nhân có vết loét tĩnh mạch mãn tính không lành đã được phân tích hoạt động phân giải protein bằng các quy trình phân tích caseinolysis theo hình tròn và phân tích zymographic, cũng như phân đoạn fibronectin bằng công nghệ miễn dịch. Hoạt động caseinolytic đã được phát hiện trong 21 trong số 25 mẫu. Một thiểu số trong số đó bị ức chế (3 mẫu bị ức chế hoàn toàn, 6 mẫu bị ức chế một phần) bởi aprotinin, một chất ức chế proteinase serine, cho thấy rằng có thể có các proteinase khác ngoài plasmin cũng chịu trách nhiệm về sự phân giải casein. Trong phân tích zymographic, 23 trong số 25 mẫu cho thấy các phản ứng dương tính cho các hoạt động enzyme đồng di chuyển với plasmin và loại kích hoạt plasminogen urokinase. Sự phân đoạn fibronectin, dấu hiệu khác của hoạt động phân giải protein, đã được quan sát trong tất cả ngoại trừ 2 vết loét. Không có mối tương quan nào được thấy giữa nhiễm trùng vi khuẩn hoặc tế bào viêm và các tham số trên trong dịch vết thương. Dịch vết thương cấp tính thu được từ các vùng cho da của các bệnh nhân phẫu thuật ghép da một phần đã được sử dụng làm mẫu kiểm soát. Trong các mẫu kiểm soát, không tìm thấy hoạt động phân giải protein trong những ngày sau phẫu thuật. Những kết quả này cho thấy rằng có hoạt động phân giải protein trong dịch tiết vết loét mãn tính và hỗ trợ khả năng rằng hoạt động phân giải protein và sự phân đoạn fibronectin tiếp theo có thể liên quan đến việc chậm lành biểu mô và hồi phục vết loét.

Tóm tắt Các vết loét chân là một vấn đề phổ biến và tái phát ở người cao tuổi, gây khó chịu và căng thẳng cho bệnh nhân cũng như tạo ra chi phí lớn cho dịch vụ chăm sóc sức khỏe. Các mảnh ghép keratinocyte nuôi cấy đã được nhiều nhà nghiên cứu sử dụng để kích thích quá trình lành của các vết loét tĩnh mạch mãn tính. Có ý kiến cho rằng chúng có thể thực hiện điều này bằng cách sản xuất các cytokine điều chỉnh quá trình lành. Tuy nhiên, các loại và mức độ cytokine trong dịch vết thương của các vết loét chân trước và trong quá trình lành vẫn chưa được biết đến. Dịch vết thương đã được thu thập từ các vết loét chân tĩnh mạch ở 18 bệnh nhân dưới lớp băng Tega-derm™ bịt kín trong khoảng 4 đến 6 giờ. Các vết loét chân được phân loại theo tiêu chí lâm sàng thành ‘đang lành’ và ‘không lành’. PDGF-AB, GM-CSE IL-1α, IL-1β, IL-6 và bFGF đã được đo bằng phương pháp ELISA và mức độ IL-1α, IL-1β và IL-6 cũng đã được đo bằng các xét nghiệm sinh học. Ảnh hưởng của dịch vết thương loét chân lên sự phát triển của fibroblast và keratinocyte đã được đo gián tiếp bằng cách đo sự kết hợp của ³H-thymidine và thử nghiệm MTT. Tổng protein, mức albumin, hoạt tính phân hủy fibronectin và hoạt tính collagenase, cả hoạt động và tiềm ẩn đã được đo. Không phát hiện sự khác biệt có ý nghĩa thống kê trong mức độ cytokine hoặc collagenase giữa các vết loét chân đang lành và không lành trong mẫu vết loét chân được nghiên cứu. Tuy nhiên, nghiên cứu này cung cấp thông tin quý giá về mức độ cytokine và collagenase trong dịch vết thương của các vết loét chân mãn tính.

Tóm tắt:  Nhiều nghiên cứu gần đây đã chỉ ra vai trò quan trọng của cytokine tiền viêm, đa chức năng là yếu tố hoại tử khối u-α (TNF‐α) trong cơ chế phòng vệ của cơ thể và các quá trình viêm. Sự biểu hiện quá mức của TNF đã được phát hiện trong da tổn thương và trong tuần hoàn của bệnh nhân vảy nến, và có đề xuất rằng TNF‐α là rất quan trọng trong bệnh này và các bệnh miễn dịch khác. Nhiều phương pháp đã được phát triển để ức chế hoạt động của TNF‐α. Những phương pháp này bao gồm ba kháng thể trung hòa khác nhau đối với TNF‐α cũng như ba thụ thể TNF‐α hòa tan khác nhau với các tính chất đặc trưng được thiết kế để liên kết với dạng trimer hòa tan 17-KDa TNF‐α và dạng gắn màng 26-KDa của TNF‐α. Các thử nghiệm lâm sàng đã chứng minh hiệu quả chống vảy nến đáng kể, và rất có thể việc chặn TNF‐α sẽ trở thành một lựa chọn điều trị quan trọng. Dữ liệu từ các thử nghiệm này góp phần làm rõ hơn về bệnh bằng cách chứng minh vai trò chính của TNF‐α. Một hiểu biết sâu sắc về sự điều hòa biểu hiện gen TNF, sản xuất protein, biểu hiện thụ thể và các con đường tín hiệu có thể dẫn đến các chiến lược điều trị mới, có khả năng quan trọng và các phân tử nhỏ hoạt động chống vảy nến, phù hợp cho ứng dụng đường uống trong tương lai. Ở đây, chúng tôi xem xét những hiểu biết hiện tại về sinh học TNF, các phương pháp để ức chế hoạt động của TNF và các hiệu ứng lâm sàng cũng như miễn dịch của chúng trong bệnh vảy nến. Ngoài ra, các tác động phòng thủ của cơ thể và hoạt động chặn TNF mạn tính cũng được thảo luận.