Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Sử dụng xét nghiệm miễn dịch enzyme thương mại để theo dõi sự sao chép virus dengue trong tế bào nuôi cấy
Tóm tắt
Các phương pháp hiện tại để định lượng virus dengue thường tốn thời gian, yêu cầu kỹ thuật phức tạp hoặc có chi phí cao. Như một sự thay thế, xét nghiệm miễn dịch enzyme thương mại Platelia™ Dengue NS1 AG (Bio-Rad Laboratories) đã được sử dụng để theo dõi một cách bán định lượng sự sao chép virus dengue trong các tế bào nuôi cấy. Sự hiện diện của protein NS1 đã được đánh giá trong dịch nuôi cấy từ các tế bào Vero và C6/36 HT bị nhiễm virus dengue. Lượng NS1 phát hiện được trong dịch nuôi cấy của các tế bào bị nhiễm tỷ lệ thuận với MOI ban đầu được sử dụng và với thời gian thu mẫu sau nhiễm. Xét nghiệm miễn dịch này cũng có thể phát hiện sự hiện diện của NS1 trong dịch nuôi cấy của các đại thực bào người bị nhiễm. Việc ức chế sự sao chép virus dengue trong các tế bào C6/36 HT được điều trị bằng thuốc hướng lysosome đã được theo dõi dễ dàng bằng cách sử dụng xét nghiệm này. Các kết quả này gợi ý rằng bộ kit Platelia™ Dengue NS1 AG có thể được sử dụng như một phương pháp thay thế nhanh chóng và đáng tin cậy để định lượng tương đối sự sao chép virus dengue trong các tế bào nuôi cấy.
Từ khóa
#virus dengue #protein NS1 #xét nghiệm miễn dịch enzyme #nuôi cấy tế bào #định lượngTài liệu tham khảo
The Pan American Health Organization[http://www.paho.org]
Lindenbach BD, Rice CM: Flaviviridae : the virus and their replication. In Virology. Edited by: Fields BN. Lippincott-Raven, Philadelphia, PA; 2001:991-1042.
Malewicz B, Jenkin HM: Development of dengue virus plaques under serum-free overlay medium. J Clin Microbiol 1979, 9: 609-614.
Stim TB: Dengue virus plaque development in simian cell systems. I. Factors influencing virus absorption and variables in the agar overlay medium. Appl Microbiol 1970, 19: 751-756.
Houng HS, Chung-Ming Chen R, Vaughn DW, Kanesa-Thasan N: Development of a fluorogenic RT-PCR system for quantitative identification of dengue virus serotypes 1–4 using conserved and serotype specific 3'noncoding sequences. J Virol Meth 2001, 95: 19-32. 10.1016/S0166-0934(01)00280-4
Kong YY, Thai CH, Tin TC, Davi S: Rapid detection, serotyping and quantitation of dengue viruses by TaqMan real-time one-step RT-PCR. J Virol Meth 2006, 138: 123-130. 10.1016/j.jviromet.2006.08.003
Sudiro TM, Zivny J, Ishiko H, Green S, Vaughn DW, Kalayanarooj S, Nisalak A, Norman JE, Ennis FA, Rothman AR: Analysis of plasma viral RNA levels during acute dengue virus infection using quantitative competitor reverse transcription-polymerase chain reaction. J Med Virol 2001, 63: 29-34. 10.1002/1096-9071(200101)63:1<29::AID-JMV1004>3.0.CO;2-S
Upanam S, Cabrera-Hernandez A, Ekkapongpisit M, Smith DR: A simplified PCR methodology for semiquantitatively analyzing dengue viruses. Jpn J Infect Dis 2006, 59: 383-387.
Wang WK, Lee CN, Kao CL, Lin YL, King CC: Quantitative competition reverse transcription-PCR for quantification of dengue virus RNA. J Clin Microbiol 2000, 38: 3306-3310.
Lambeth CR, White LJ, Johnston RE, de Silva AM: Flow cytometry-based assay for titrating dengue virus. J Clin Microbiol 2005, 43: 3267-3272. 10.1128/JCM.43.7.3267-3272.2005
Payne AF, Binduga-Gajewska I, Kauffman EB, Kramer LD: Quantitation of flavivirus by fluoresce focus assay. J Virol Meth 2006, 134: 183-189. 10.1016/j.jviromet.2006.01.003
Winkler G, Maxwell SE, Ruemmler C, Stoller V: Newly synthesized dengue-2 virus nonstructural protein NS1 is a soluble protein but becomes partially hydrophobic and membrane-associated after dimerization. Virology 1989, 171: 302-305. 10.1016/0042-6822(89)90544-8
Lindenbach BD, Rice CM: Trans-complementation of yellow fever virus NS1 reveals a role in early RNA replication. J Virol 1997, 71: 9608-9617.
Lindenbach BD, Rice CM: Genetic interaction of flavivirus nonstructural proteins NS1 and NS4A as a determinant of replicase function. J Virol 1999, 73: 4611-4621.
Muylaert IA, Chambers TJ, Galler R, Rice CM: Mutagenesis of the N-linked glycosylation sites of the yellow fever virus NS1 protein: effects on virus replication and mouse neurovirulence. Virology 1996, 222: 159-168. 10.1006/viro.1996.0406
Muylaert IR, Galler R, Rice CM: Genetic analysis of the yellow fever virus NS1 protein: identification of a temperature-sensitive mutation which blocks RNA accumulation. J Virol 1997, 71: 291-298.
Flamand M, Megret F, Mathieu M, Lepault J, Rey FA, Deubel V: Dengue virus type 1 nonstructural glycoprotein NS1 is secreted from mammalian cells as a soluble hexamer in a glycosylation-dependent fashion. J Virol 1999, 73: 6104-6110.
Alcon S, Talarmin A, Debruyne M, Falconar A, Deubel V, Flamand M: Enzyme-linked immunoassay specific to dengue virus type 1 non-structural protein NS1 reveals circulation of the antigen in the blood during the acute phase of disease in patients experiencing primary or secondary infections. J Clin Microbiol 2002, 40: 376-381. 10.1128/JCM.40.02.376-381.2002
Young PR, Hilditch PA, Bletchly C, Halloran W: An antigen capture enzyme-linked immunosorbent assay reveals high levels of the dengue virus protein NS1 in the sera of infected patients. J Clin Microbiol 2000, 38: 1053-1057.
Dussart P, Labeau B, Lagathu G, Louis P, Nunes MRT, Rodrigues SG, Storck-Hermann C, Cesaire R, Morvan J, Flamand M, Baril L: Evaluation of an enzyme immunoassay for detection of dengue virus NS1 antigen in human serum. Clin Vacc Immunol 2006, 13: 1185-1189. 10.1128/CVI.00229-06
Kumarasamy V, Chua SK, Hassan Z, Huahab AHA, Chem JK, Mohamad M, Chua KB: Evaluating the sensitivity of a commercial dengue NS1-antigen capture ELISA for early diagnosis for acute dengue virus infection. Singapore Med J 2007, 48: 669-673.
Modis Y, Ogata S, Clements D, Harrison SC: A ligand-binding pocket in the dengue virus envelope glycoprotein. Proc Natl Acad Sci USA 2003, 100: 6986-6991. 10.1073/pnas.0832193100
Keelapang P, Sriburi R, Supasa S, Payadee N, Songjaeng A, Jairungsri A, Puttikhung C, Kasinrerk W, Malasit P, Sittisombut N: Alterations of pr-M cleavage and virus export in pr-M junction chimeric dengue virus. J Virol 2004, 78: 2367-2381. 10.1128/JVI.78.5.2367-2381.2004
Leblois H, Young PR: Maturation of the dengue-2 virus NS1 protein in insect cells: effects of downstream NS2A sequences on baculovirus-expressed gene constructs. J Gen Virol 1995, 76: 979-984.
Gould EA, Clegg JC: Growth, titration and purification of alphaviruses and flaviviruses. In Virology: a practical approach. Edited by: Mahy BWJ. IRL press, Oxford, U.K; 1991:43-78.
Reyes-Del Valle J, Chavez-Salinas S, Medina F, Del Angel RM: Heat shock protein 90 and heat shock protein 70 are components of dengue virus receptor complex in human cells. J Virol 2005, 79: 4557-4567. 10.1128/JVI.79.8.4557-4567.2005