Isolated và đặc trưng các đột biến missense trong protein ức chế chung Ssn6 của Saccharomyces cerevisiae

Ssn6, một protein chứa lặp lại TPR, kết hợp với protein Tup1 để hình thành một phức hợp ức chế phiên mã tổng quát trong Saccharomyces cerevisiae. Như một phần của phân tích di truyền phức hợp này, chúng tôi đã nhắm mục tiêu vào các đột biến tại vùng mã hóa lặp lại TPR của gen SSN6, và áp dụng phương pháp chọn lọc cho sự biểu hiện liên tục của gen hypoxic ANB1. Tất cả trừ một trong các đột biến thu được đều không biểu hiện đầy đủ protein Ssn6, cho thấy rằng chúng có chứa các đột biến xóa, dịch khung hoặc đột biến nonsense. Một đột biến missense mã hóa một protein với ba thay thế axit amin, và sự kết hợp này là cần thiết cho kiểu hình đột biến. Một đột biến, sự thay thế proline cho serine tại codon 51, đã được sử dụng trong một vòng đột biến thứ hai và tại đây đã có được sáu allele thay thế đa. Những allele này được tách biệt thành các đột biến thành phần của chúng, và một lần nữa, tất cả trừ một trong các thay thế đơn đều thể hiện kiểu hình hoang dã. Các đột biến đơn và đa được đặc trưng dựa trên tác động của chúng đến sự ức chế gen SUC2 cảm ứng bởi glucose và gen kiểu giao tử a STE2. Các protein Ssn6 đột biến cũng được thử nghiệm về khả năng kết hợp với Tup1. Đột biến S51P, mặc dù không có kiểu hình đột biến, đã mất khả năng kết hợp hoàn toàn với Tup1 trong ống nghiệm. Nói chung, những thay thế đơn mà rơi vào hai lặp lại TPR đầu tiên đã làm suy giảm hoạt động kết hợp với Tup1, trong khi hai cái rơi vào các lặp lại TPR năm và tám vẫn giữ được hoạt động này. Sự biểu hiện quá mức của TUP1 phần nào đã làm giảm úng hình đột biến chỉ ở một số đột biến đa. Các kết quả được thảo luận dựa trên các mô hình hiện tại về chức năng của Ssn6 và cấu trúc của các lặp lại TPR.