Mở Rộng DNA Dựa Trên Mồi Bằng Enzyme DNA Polymerase Kháng Nhiệt

American Association for the Advancement of Science (AAAS) - Tập 239 Số 4839 - Trang 487-491 - 1988
Randall K. Saiki1, David H. Gelfand2, Susanne Stoffel2, Stephen J. Scharf1, Russell Higuchi1, Glenn T. Horn1, Kary B. Mullis1, Henry A. Erlich1
1Cetus Corporation, Department of Human Genetics, Emeryville, CA 94608.
2Cetus Corporation, Department of Microbial Genetics, Emeryville, CA 94608.

Tóm tắt

Một enzyme DNA polymerase kháng nhiệt đã được sử dụng trong quy trình khuếch đại DNA in vitro, phản ứng chuỗi polymerase. Enzyme này, được tách chiết từ Thermus aquaticus , đã đơn giản hóa quy trình và, bằng cách cho phép phản ứng khuếch đại diễn ra ở nhiệt độ cao hơn, đã cải thiện đáng kể độ đặc hiệu, sản lượng, độ nhạy và chiều dài của các sản phẩm có thể được khuếch đại. Các trình tự gen đơn bản đã được khuếch đại gấp hơn 10 triệu lần với độ đặc hiệu rất cao, và các đoạn DNA lên đến 2000 cặp base đã được khuếch đại một cách dễ dàng. Thêm vào đó, phương pháp này đã được sử dụng để khuếch đại và phát hiện một phân tử DNA mục tiêu chỉ có mặt một lần trong mẫu chứa 10 5 tế bào.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

AIR, G.M., NUCLEOTIDE-SEQUENCE CODING FOR THE SIGNAL PEPTIDE AND N-TERMINUS OF THE HEMAGGLUTININ FROM AN ASIAN (H2N2) STRAIN OF INFLUENZA-VIRUS, VIROLOGY 97: 468 (1979).

10.1038/327293a0

BUGAWAN T.L. unpublished data.

CHIEN, A, DEOXYRIBONUCLEIC-ACID POLYMERASE FROM EXTREME THERMOPHILE THERMUS-AQUATICUS, JOURNAL OF BACTERIOLOGY 127: 1550 (1976).

EMBURY, S.H., RAPID PRENATAL-DIAGNOSIS OF SICKLE-CELL-ANEMIA BY A NEW METHOD OF DNA ANALYSIS, NEW ENGLAND JOURNAL OF MEDICINE 316: 656 (1987).

GELFAND D.H. unpublished data.

HAYES W GENETICS BACTERIA TH (1965).

HORN G.T. unpublished data.

KWOK, S, IDENTIFICATION OF HUMAN-IMMUNODEFICIENCY-VIRUS SEQUENCES BY USING INVITRO ENZYMATIC AMPLIFICATION AND OLIGOMER CLEAVAGE DETECTION, JOURNAL OF VIROLOGY 61: 1690 (1987).

LEE, M.S., DETECTION OF MINIMAL RESIDUAL CELLS CARRYING THE T(14-18) BY DNA-SEQUENCE AMPLIFICATION, SCIENCE 237: 175 (1987).

Maniatis T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1982).

10.1016/S0076-6879(80)65059-9

MCMAHON, G, CHARACTERIZATION OF C-KI-RAS ONCOGENE ALLELES BY DIRECT SEQUENCING OF ENZYMATICALLY AMPLIFIED DNA FROM CARCINOGEN-INDUCED TUMORS, PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA 84: 4974 (1987).

MULLIS, K.B., SPECIFIC SYNTHESIS OF DNA INVITRO VIA A POLYMERASE-CATALYZED CHAIN-REACTION, METHODS IN ENZYMOLOGY 155: 335 (1987).

REED, K.C., RAPID TRANSFER OF DNA FROM AGAROSE GELS TO NYLON MEMBRANES, NUCLEIC ACIDS RESEARCH 13: 7207 (1985).

SAIKI, R.K., ANALYSIS OF ENZYMATICALLY AMPLIFIED BETA-GLOBIN AND HLA-DQ-ALPHA DNA WITH ALLELE-SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE PROBES, NATURE 324: 163 (1986).

10.1126/science.2999980

SAIKI R.K. unpublished data.

10.1073/pnas.74.12.5463

10.1126/science.3461561

Tuan, D., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 80: 6937 (1983).

10.1038/330384a0

WRISCHNIK, L.A., LENGTH MUTATIONS IN HUMAN MITOCHONDRIAL-DNA - DIRECT SEQUENCING OF ENZYMATICALLY AMPLIFIED DNA, NUCLEIC ACIDS RESEARCH 15: 529 (1987).