Đo lường vùng ổn định hơn của osteocalcin trong huyết thanh bằng ELISA với hai kháng thể đơn dòng

Osteocalcin nguyên vẹn của con người được tinh chế từ xương đùi cũng như các đoạn thử nghiệm của phân tử nguyên vẹn [các axit amin (aa) 1-19, 20-43, và 45-49] đã được sử dụng để tạo ra và sàng lọc các kháng thể đơn dòng (MAbs). Một phương pháp ELISA hai vị trí đã được phát triển để đo lường osteocalcin của con người trong huyết thanh bằng cách sử dụng các MAbs này. Một MAb xác định vùng giữa của osteocalcin con người (aa20-43) đã được sử dụng làm kháng thể bắt giữ, và một MAb đặc hiệu với đầu NH2 (aa7-19) gắn peroxidase đã được sử dụng để phát hiện. Osteocalcin của con người thu được từ xương đã được sử dụng để hiệu chuẩn, và tính song song đã được quan sát cho osteocalcin từ mẫu huyết thanh, các đoạn giữa NH2 (aa1-43), và osteocalcin tổng hợp của con người. Cả độ biến thiên giữa các xét nghiệm và trong xét nghiệm đều < 7%. Nồng độ osteocalcin trong huyết thanh ở phụ nữ khỏe mạnh trước mãn kinh (n = 49) là 18.3 +/- 4.2 microgam/L (trung bình +/- SD) và 28.6 +/- 9.7 microgam/L ở phụ nữ sau mãn kinh sớm (n = 114). Nồng độ huyết thanh trung bình (n = 10) giảm 10% sau 7 ngày bảo quản ở 4 độ C, trong khi nồng độ osteocalcin nguyên vẹn của con người giảm 63%. N-MID ELISA và IRMA đo lường osteocalcin nguyên vẹn của con người đã được sử dụng để theo dõi tác động của liệu pháp thay thế hormone trong một nghiên cứu hồi cứu. Một sự giảm đáng kể về nồng độ trước mãn kinh chỉ được phát hiện trong N-MID ELISA.