Gán nhãn miễn dịch enzym cho kháng thể đơn dòng bằng cách sử dụng phức hợp miễn dịch của phosphatase kiềm và kháng thể đơn dòng kháng phosphatase kiềm (phức hợp APAAP).

Một kháng thể đơn dòng murine đặc hiệu cho phosphatase kiềm ruột bê đã được chuẩn bị và sử dụng trong kỹ thuật cầu kháng thể không gắn nhãn để gán nhãn cho các kháng thể đơn dòng. Quy trình này - phương pháp kháng thể đơn dòng kháng phosphatase kiềm (APAAP) - cung cấp gán nhãn miễn dịch tế bào tuyệt vời cho các lát mô và bã tế bào, so sánh độ rõ nét và cường độ với gán nhãn miễn dịch peroxidase. Nếu gán nhãn enzyme được phát triển với muối naphthol như một tác nhân kết hợp và Fast Red hoặc hexazotized new fuchsin như tác nhân bắt giữ, sản phẩm phản ứng đỏ sống động thu được rất dễ dàng phát hiện bằng mắt người. Vì lý do này, kỹ thuật APAAP được thấy đặc biệt phù hợp cho gán nhãn bã tế bào (cho cả kháng nguyên dịch bào và màng bề mặt) và để phát hiện số lượng tế bào mang kháng nguyên thấp trong một mẫu (ví dụ: tế bào ung thư trong dịch màng ác tính). Đã phát hiện rằng có thể tăng cường cường độ phản ứng gán nhãn APAAP một cách đáng kể bằng cách lặp lại các bước ủ thứ hai và thứ ba (tức là, kháng thể "cầu" không gắn nhãn và phức hợp APAAP). Kỹ thuật APAAP vượt trội hơn gán nhãn miễn dịch peroxidase cho việc nhuộm các mô giàu peroxidase nội sinh, và có thể được sử dụng kết hợp với các phương pháp miễn dịch peroxidase để nhuộm miễn dịch enzym kép. Phương pháp cũng có thể áp dụng để phát hiện các phân tử kháng nguyên sau khi chúng được chuyển điện di từ gel SDS-polyacrylamide sang tấm nitrocellulose ("immunoblotting").