Phát hiện sản phẩm chuỗi polymerase đặc hiệu bằng cách sử dụng hoạt tính exonuclease 5'----3' của enzyme DNA polymerase Thermus aquaticus

Hoạt tính exonuclease 5'----3' của enzyme ổn nhiệt DNA polymerase Thermus aquaticus có thể được sử dụng trong hệ thống phát hiện sản phẩm của phản ứng chuỗi polymerase (PCR) để tạo ra tín hiệu có thể phát hiện được đồng thời với quá trình khuếch đại. Một probe oligonucleotide, không thể kéo dài ở đầu 3', được đánh dấu ở đầu 5', và được thiết kế để kết hợp với trình tự mục tiêu, được đưa vào thí nghiệm PCR. Sự liên kết của probe với một trong các sợi sản phẩm của PCR trong quá trình khuếch đại tạo ra một cơ chất phù hợp cho hoạt tính exonuclease. Trong quá trình khuếch đại, hoạt tính exonuclease 5'----3' của enzyme DNA polymerase T. aquaticus phân hủy probe thành các mảnh nhỏ hơn có thể phân biệt được với probe chưa bị phân hủy. Thí nghiệm này nhạy cảm và cụ thể, và là một cải tiến đáng kể so với các phương pháp phát hiện phức tạp hơn.