Phân đoạn và các tính chất liên kết actin của ABP-50: Yếu tố kéo dài-1 alpha của Dictyostelium

Wiley - Tập 20 Số 4 - Trang 279-288 - 1991
Suranganie Dharmawardhane1, Mark J. Demma2, Fan Yang2, John S. Condeelis2
1Department of Anatomy and Structural Biology, Albert Einstein College of Medicine, Bronx. NY 10461
2Department of Anatomy and Structural Biology, Albert Einstein College of Medicine, Bronx, New York

Tóm tắt

Tóm tắt

ABP-50 là yếu tố kéo dài-1 alpha (EF-1 alpha) của Dictyostelium discoideum (Yang et al.: Nature 347:494–496, 1990). ABP-50 cũng là một protein liên kết và bó actin (Demma et al.: J. Biol. Chem. 265:2286–2291, 1990). Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã điều tra sự phân đoạn của ABP-50 trong cả tế bào nghỉ và tế bào được kích thích. Kính hiển vi huỳnh quang miễn dịch cho thấy rằng bên cạnh việc đồng hiện diện với F-actin ở các phần mở rộng bề mặt trong các tế bào không được kích thích, ABP-50 có sự phân bổ khuếch tán trong toàn bộ chất tế bào. Khi thêm cAMP, một chất hóa học thu hút, ABP-50 trở nên tập trung trong các filopodia được mở rộng như một phản ứng với sự kích thích. Việc định lượng ABP-50 trong các phân đoạn không tan và tan trong Triton của các tế bào nghỉ chỉ ra rằng 10% tổng lượng ABP-50 được phục hồi trong cytoskeleton Triton, trong khi phần còn lại nằm trong phân đoạn chất tế bào tan. Sự kích thích bằng cAMP làm tăng sự kết hợp của ABP-50 vào cytoskeleton Triton. Đỉnh điểm của sự kết hợp ABP-50 vào giây thứ 90 tương ứng với việc mở rộng filopod. Sự kết tủa miễn dịch ABP-50 trong chất tế bào từ các tế bào không được kích thích bằng cách sử dụng kháng thể đa dòng tinh khiết affinity cho thấy sự kết tủa cùng với actin không sợi với ABP-50. ABP-50 tinh chế liên kết với G-actin với Kd khoảng 0.09 μM. Sự tương tác giữa ABP-50 và G-actin bị ức chế bởi GTP nhưng không bị GDP ức chế, trong khi việc bó lại của F-actin bởi ABP-50 không bị ảnh hưởng bởi các nucleotide guanine. Chúng tôi kết luận rằng một lượng đáng kể ABP-50 liên kết với G- hoặc F-actin in vivo và rằng sự tương tác giữa ABP-50 và F-actin trong cytoskeleton được điều chỉnh bởi sự kích thích hóa học.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

10.1016/0012-1606(84)90124-6

Bresnick A. R., 1991, Isolation of actin binding proteins from Dictyostelium discoideum, Methods Enzymol., 196, 603

10.1002/cm.970100113

10.1002/dvg.1020110504

10.1016/0014-5793(83)80311-1

10.1016/0014-5793(84)81206-5

Demma M., 1990, Isolation of an abundant 50,000 dalton actin filament bundling protein from Dictyostelium amoebae, J. Biol. Chem., 265, 2286, 10.1016/S0021-9258(19)39973-9

Dever T. E., 1989, Location of seven post‐translational modifications in rabbit elongation factor‐1 alpha including dimethyllysine, trimethyllysine and glycerolphosphoryl ethanolamine, J. Biol. Chem., 264, 20518, 10.1016/S0021-9258(19)47093-2

10.1002/cm.970130107

Dharmawardhane S., 1989, Regulation of ABP‐50, an actin binding protein from Dictyostelium discoideum, J. Cell Biol., 109, 273a

10.1083/jcb.72.2.339

10.1083/jcb.104.6.1539

10.1016/0161-5890(79)90086-5

Fechheimer M., 1984, Isolation and characterization of a 30,000 dalton calcium‐sensitive actin cross‐linking protein from Dictyostelium discoideum, J. Biol. Chem., 259, 4514, 10.1016/S0021-9258(17)43076-6

10.1128/MCB.5.5.1100

10.1002/jcb.240370304

10.1073/pnas.79.11.3433

Hock R. S., 1985, Isolation and characterization of a 50 K dalton actin‐binding protein from Dictyostelium discoideum that is associated with actin bundles, J. Cell Biol., 101, 407a

10.1002/cm.970090303

10.1038/227680a0

10.1016/0006-291X(83)91011-2

McRobbie S. J., 1984, Chemoattractant‐mediated changes in cytoskeletal actin of cellular slime moulds, J. Cell Sci., 68, 139, 10.1242/jcs.68.1.139

Rosenberry T. L., 1989, Biosynthetic incorporation of [3H] ethanolamine into protein synthesis elongation factor‐1 alpha reveals a new post‐translational modification, J. Biol. Chem., 264, 7096, 10.1016/S0021-9258(18)83203-3

10.1111/j.1749-6632.1949.tb27297.x

10.1016/0003-9861(89)90384-6

10.1021/bi00427a015

Vanderkerckhove J., 1990, The covalent structure of Acanthamoeba actobindin, J. Biol. Chem., 265, 12801, 10.1016/S0021-9258(19)38230-4

10.1111/j.1432-1033.1986.tb10125.x

Whiteheart S. W., 1989, Murine elongation factor‐1 alpha (EF‐1 alpha) is post translationally modified by novel amide‐linked ethanolamine‐phosphoglycerol moieties, J. Biol. Chem., 264, 14334, 10.1016/S0021-9258(18)71682-7

10.1038/347494a0

Thông tin
Thông tin xuất bản

Wiley

Tập 20 Số 4

279-288

Thông tin tác giả