Jan A. Nolta1, Elzbieta M. Smogorzewska1, Donald B. Kohn1
1From the Division of Research Immunology/Bone Marrow Transplantation, Childrens Hospital Los Angeles, University of Southern California School of Medicine, Departments of Pediatrics and Microbiology, Los Angeles, CA.
Tóm tắt
Chúng tôi đã tìm cách xác định các điều kiện tối ưu cho việc chuyển giao gen qua virus retro đối với các tiền thân huyết học sống lâu dài của người từ tủy xương và máu ngoại vi. Các tế bào CD34+ đã được chuyển giao gene qua các véc tơ vi-rút retro LN và G2 với sự có mặt hoặc không có sự hỗ trợ của mô đệm và có hoặc không có bổ sung cytokine. Sau khi chuyển giao gene, một phần của các tế bào này được đưa vào thí nghiệm tạo cụm trong methylcellulose, với hoặc không có G418, để đánh giá mức độ chuyển giao gene vào các tiền thân đã cam kết. Các tế bào còn lại từ mỗi thí nghiệm được cấy ghép vào chuột miễn dịch thiếu để cho phép phân tích quá trình chuyển giao của các tiền thân sống lâu dài. Các tế bào hình cụm của người có trong tủy xương chuột đã được phân tích sau các thời gian ghép từ 2 đến 11 tháng. Các tế bào được đưa vào thử nghiệm tạo cụm đặc hiệu cho người với và không có G418 để đánh giá mức độ chuyển giao gene của các tiền thân nguyên thủy. Các cụm tế bào con người riêng lẻ cũng được phân tích bằng phản ứng chuỗi polymerase để xác định sự hiện diện của provirus. Các tiền thân tủy xương chỉ được chuyển giao gene một cách hiệu quả khi có sự hiện diện của mô đệm, trong khi các tiền thân trong máu ngoại vi được huy động có thể được chuyển giao một cách hiệu quả trong sự hiện diện của cả mô đệm hoặc cytokine. Việc bổ sung các cytokine interleukin-3, interleukin-6 và yếu tố tế bào gốc không làm tăng thêm mức độ chuyển giao gene trong sự có mặt của mô đệm. Thêm vào đó, các tiền thân CD34+ của người từ tủy xương hoặc máu ngoại vi được chuyển giao trong 3 ngày mà không có mô đệm đã không tạo ra sự ghép bền vững, lâu dài ở chuột bnx. Các chuột được cấy ghép bằng cùng một nhóm tiền thân người đã được chuyển giao trong sự hiện diện của mô đệm trong 3 ngày đã có mức độ cấy ghép tế bào người đáng kể tại cùng những thời điểm, từ 7 đến 11 tháng sau khi cấy ghép. Dữ liệu của chúng tôi cho thấy mất mát các tiền thân sống lâu dài của người trong quá trình chuyển giao gene in vitro 3 ngày mà không có sự hỗ trợ của mô đệm. Do đó, sự hiện diện của mô đệm tủy xương có lợi đôi bên vì nó tăng cường hiệu quả chuyển giao gene và là điều cần thiết cho sự sống sót của các tiền thân huyết học nguyên thủy sống lâu dài của người.
