A.Thomas Look, Stephen C. Peiper, Edwin C. Douglass, Jeffrey M. Trent, Charles J. Sherr
Tóm tắt
Tóm tắt
Sự khuếch đại tự phát của các gen mã hóa cho hai kháng nguyên màng đơn bào myeloid người khác nhau đã được quan sát sau khi chuyển giao gen thông qua DNA. Quá trình này được thực hiện bằng cách chuyển DNA từ dòng tế bào đơn bào myeloid người HL-60 vào tế bào mô liên kết chuột NIH-3T3. Các tế bào nhận đã biến đổi với biểu hiện khuếch đại đáng kể của một trong hai polypeptit màng người cho, gp150 hoặc p67, được tách biệt bằng máy phân tách tế bào hoạt hóa huỳnh quang (FACS), sử dụng các kháng thể đơn dòng đặc hiệu cho tế bào đơn bào người. Quá trình kết tủa miễn dịch các polypeptit đã được phóng xạ iod hóa enzyme từ bề mặt của các tế bào NIH-3T3 đã biến đổi xác nhận rằng biểu hiện của các protein này đã được khuếch đại gấp mười đến hai mươi lần so với biểu hiện của chúng trên các dòng tế bào đơn bào người. DNA tế bào từ các biến thể thứ cấp và thứ ba đã được nhân bản với mức biểu hiện cao của gp150 và p67 chứa các tập hợp đoạn DNA hạn chế được khuếch đại, có khả năng lai ghép với các chuỗi DNA lặp lại của người. Phân tích tế bào học ở các phân nhóm thể hiện quá mức gp150 cho thấy sự hiện diện của các phút đôi ngoài nhiễm sắc thể (DM), có mối liên hệ với sự biểu hiện không ổn định của polypeptit màng. Các chuỗi DNA của người trong các dòng clones dương tính với gp150 không được định vị trên nhiễm sắc thể, phù hợp với sự liên kết của chúng với DMs ngoài nhiễm sắc thể. Ngược lại, các phân nhóm dương tính với p67 biểu hiện ổn định kháng nguyên, và sự lai ghép tại chỗ vào các tấm phân chia giữa kỳ cho thấy rằng các chuỗi DNA người đã được khuếch đại được tích hợp vào một nhiễm sắc thể đánh dấu cụ thể. Phân tích tế bào học của phân nhóm NIH-3T3 cha mẹ được sử dụng trong các nghiên cứu này tiết lộ có DMs ở tỷ lệ phần trăm thấp trong các giai đoạn giữa kỳ, cho thấy rằng các tế bào nhận có xu hướng khuếch đại DNA của người cho.
