Methods in Cell Science

Streptococcus agalactiae hay liên cầu khuẩn nhóm B (GBS) là những vi khuẩn cầu gram dương và là nguyên nhân chính gây nên viêm phổi, nhiễm trùng huyết và viêm màng não ở trẻ sơ sinh. Nhiễm trùng GBS ở trẻ sơ sinh có thể xảy ra trước hoặc trong khi sinh. GBS đã được nuôi cấy từ màng ối của các bà bầu và vì vậy đã được liên kết với viêm màng ối và chuyển dạ sớm. Một con đường tiềm năng để GBS gây nhiễm trùng ở trẻ sơ sinh là xâm nhập vào màng nhau thai của các bà bầu đã bị nhiễm. Trong phòng thí nghiệm của chúng tôi, chúng tôi đã xây dựng các hệ thống in vitro để mô phỏng một số sự kiện trong quá trình định cư và xâm nhập của GBS vào mô tế bào biểu mô của chủ. Bằng cách sử dụng các kỹ thuật để phát triển các văn hóa nguyên sơ của cả tế bào màng ối và tế bào ối được tách từ nhau thai của phụ nữ sinh mổ, chúng tôi đã thiết lập được một mô hình phù hợp để điều tra một số khía cạnh của sự bám dính và xâm nhập của GBS vào màng nhau thai. Để xác định các phân tử liên quan cần thiết cho GBS để định cư vào nhiều mô mà chúng gặp phải trong quá trình nhiễm trùng, chúng tôi đã áp dụng đa dạng các phương pháp sinh hóa với các chế phẩm màng tế bào chủ cũng như các protein ma trận ngoại bào tinh khiết. Những kỹ thuật này đang cho phép chúng tôi tiếp tục mô tả các cơ chế gây bệnh được GBS sử dụng.

The ribonucleoprotein, telomerase, is believed to be responsible for the maintenance of telomere length in immortal and cancer cells. A PCR-based assay for the detection of telomerase activity (TRAP assay: telomeric repeat amplification protocol) was developed, allowing fast and efficient detection of telomerase activity when sample amounts are limiting. Of the thousands of primary human tumors examined using the TRAP assay, almost 90% have been shown to exhibit telomerase activity. Thus, for the early detection of cancer and for the rapid screening of compounds and drugs in cancer therapeutics, methods for the detection of telomerase activity are rapidly emerging. The recently developed TRAP-ezeTM kit from Oncor, Inc. gives increased sensitivity with decrease sample processing time, allowing improved detection of telomerase activity in a large number of samples. In the present study, we have addressed some of the technical aspects and limitations of critical importance for reproducibility, reliability, and linearity of the standard TRAP assay and the TRAP-ezeTM kit using cell culture and clinical materials.

A protein assay method is described that involves simultaneous dye binding and precipitation of protein. It has a sensitivity comparable to the widely used Lowry and Bradford methods without the chemical interferences sometimes encountered with these methods in tissue culture conditions. The assay uses readily available reagents and is applicable to a variety of cell preparations.

The endothelial cells of the brain microvasculature provide both physical and enzymatic barriers to the exchange of molecules between the extracellular fluid environment of the brain and the systemic circulation. To better understand these barrier properties and the factors that influence them at the cellular level, an in vitro model of the blood-brain barrier has been developed using primary cultures of bovine brain microvessel endothelial cells. The focus of the present paper is on the procedures associated with the isolation, culturing, and maintenance of bovine brain microvessel endothelial cells. Experimental applications of the cell culture model in studying the blood-brain barrier and efforts directed at improving the current cell culture model are also discussed.

Several protocols are presented for preparation and transfection of Baculovirus and plasmid DNAs into Lepidopteran insect cells using the calcium-phosphate co-precipitation technique. Important parameters for optimum efficiency include the inherent susceptibility of the recipient cell line for transfection, and the method of preparation of viral and plasmid DNAs. The protocols presented provide reproducible high efficiencies for transfection of several Lepidopteran cell lines.

Isolated rodent spleen cells, cultured for 48 hours with the mitogen Concanavalin A (Con A), consistently provide a cycling population with which to test the cell cycle effects (both temporal and quantitative) of various toxicants. Any modification in the cell cycle is then analyzed by flow cytometric techniques and computer-aided statistical comparisons of the DNA histogram of the cell populations.