Journal of Experimental Medicine

Giun filaria, Litomosoides carinii, có tỷ lệ chuyển hóa glucose hiếu khí và kỵ khí cao. Trong điều kiện hiếu khí, 30 đến 45 phần trăm glucose được sử dụng được chuyển thành acid lactic, 25 đến 35 phần trăm thành acid acetic, và 10 đến 20 phần trăm thành polysaccharide. Trong điều kiện kỵ khí, hơn 80 phần trăm tổng carbohydrate bị loại bỏ bởi giun filaria được chuyển hóa thành acid lactic, phần còn lại được giải thích bởi sự sản xuất acid acetic.

Tỷ lệ sản xuất acid lactic hiếu khí và kỵ khí cao cùng với sự tổng hợp polysaccharide hiếu khí, cũng như sự vắng mặt của sự gia tăng hấp thụ oxy sau khi kỵ khí, phân biệt giun filaria, L. carinii, với các đặc điểm chuyển hóa đã biết của tất cả các loại giun sán khác và hầu hết các loài động vật không xương sống khác.

Tỷ lệ sử dụng lactate và pyruvate hiếu khí của giun filaria có vẻ chậm hơn nhiều so với glucose. Trong điều kiện kỵ khí, sự phân giải của hai mol pyruvate thành một mol lactate, một mol acetate, và một mol CO2 đã xảy ra. Trong điều kiện hiếu khí, sự sản xuất acetate từ pyruvate vượt hơn cả lactate. Một tỷ lệ đáng kể pyruvate được chuyển hóa hiếu khí bởi giun filaria không được oxy hóa thành acetate.

Trong sự hiện diện của fluoroacetate, sự ủ hiếu khí của giun filaria trong môi trường chứa glucose đã tạo ra sự giảm đáng kể trong hô hấp của các sinh vật, tích lũy pyruvate, giảm formation acetate, và tăng glycolysis hiếu khí. Nồng độ thấp của fluoroacetate (1 x 10–3 M) đã ức chế chuyển hóa oxy của pyruvate mà không dẫn đến sự chuyển đổi pyruvate thành acetate; nồng độ cao hơn của chất ức chế này cũng làm giảm oxy hóa pyruvate thành acetate. Không có bằng chứng nào cho thấy fluoroacetate ức chế hô hấp của giun filaria do ức chế cạnh tranh oxy hóa acetate.

Hô hấp và glycolysis của giun filaria đã giảm đáng kể bởi nồng độ thấp của p-chloromercuric benzoate. Sự ức chế này không thể đảo ngược bằng một lượng lớn thioglycollate, cystein, glutathione, hoặc H2S.

Hô hấp của giun filaria bị ức chế hoàn toàn bởi cyanide (2 x 10–4 M).

Các loại phẩm nhuộm cyanine, một nhóm hợp chất có hoạt tính hóa trị cao trong filariasis ở chuột bông, đã ức chế ở nồng độ thấp (6,5 x 10–8 M) sự hấp thụ oxy của giun filaria. Sự giảm này trong chuyển hóa oxy liên quan đến sự gia tăng bù đắp trong glycolysis hiếu khí của các giun và với tỷ lệ giảm sản xuất acetate và tổng hợp polysaccharide. Các thay đổi chuyển hóa tương tự đã được quan sát ở giun filaria được lấy ra từ chuột bông mà đã được cung cấp liều lượng dưới trị liệu của phẩm nhuộm cyanine.

Các nồng độ phẩm nhuộm cyanine gây ra sự ức chế gần như hoàn toàn hô hấp của giun filaria không có tác động đến tỷ lệ glycolysis kỵ khí của các giun cũng như đối với hoạt động của cytochrome C hoặc cytochrome oxidase.

Kết luận rằng, trái ngược với nhiều động vật không xương sống ký sinh khác, chuyển hóa oxy là cần thiết cho sự sống sót của giun filaria, L. carinii, và rằng hoạt tính hóa trị của các phẩm nhuộm cyanine trong filariasis ở chuột bông là do tác động ức chế của nhóm hợp chất này đối với chuyển hóa hô hấp của ký sinh trùng.

CCR5 là một receptor chemokine được biểu hiện trên tế bào T và tế bào đại thực bào, đồng thời cũng hoạt động như là thụ thể chính cho các biến thể HIV-1 có tính chất M-tropic. Để hiểu cơ sở phân tử của sự gắn kết giữa các chemokine và HIV-1 với CCR5, chúng tôi đã phát triển một số kháng thể đơn dòng (mAbs) có khả năng ức chế các tương tác khác nhau của CCR5, và đã xác định các vị trí gắn kết của những kháng thể này bằng cách sử dụng một loạt các chimeras CCR5/CCR2b. Một mAb có tên là 2D7 đã hoàn toàn chặn lại sự gắn kết và hóa hướng động của ba ligand chemokine tự nhiên của CCR5, gồm RANTES (regulated on activation normal T cell expressed and secreted), protein viêm đại thực bào (MIP)-1α, và MIP-1β, đối với các tế bào chuyển gen CCR5. MAb này là một đối kháng thực sự của CCR5, vì nó không kích thích sự tăng nồng độ canxi nội bào trong các tế bào chuyển gen CCR5, mà lại ngăn chặn các phản ứng canxi được gây ra bởi RANTES, MIP-1α hoặc MIP-1β. MAb này ức chế hầu hết các phản ứng hóa hướng động của tế bào T kích hoạt đối với RANTES và MIP-1α, nhưng không ảnh hưởng đến tế bào đơn nhân, gợi ý việc sử dụng khác nhau của các receptor chemokine giữa hai loại tế bào này. Vị trí gắn kết của 2D7 đã được xác định ở vòng ngoại bào thứ hai của CCR5, trong khi một nhóm kháng thể không thể chặn gắn kết chemokine đều nằm ở vùng NH2-terminus của CCR5. Việc ức chế hiệu quả sự gắn kết của glycoprotein màng gp120 nguồn gốc từ HIV-1 M-tropic với CCR5 có thể được đạt được bằng các mAbs nhận diện vòng ngoại bào thứ hai hoặc vùng NH2-terminus, mặc dù vòng ngoại bào thứ hai cho thấy sự ức chế vượt trội hơn. Ngoài ra, 2D7 cũng đã ức chế hiệu quả tính lây nhiễm của một số biến thể HIV-1 M-tropic và dual-tropic trong ống nghiệm. Những kết quả này gợi ý một mô hình phức tạp cho sự gắn kết của gp120 HIV-1 với các vùng khác nhau của CCR5, nhưng một mô hình tương đối đơn giản cho sự gắn kết của chemokine. Chúng tôi kết luận rằng vòng ngoại bào thứ hai của CCR5 là một vị trí mục tiêu lý tưởng cho việc phát triển các chất ức chế sự gắn kết của cả chemokine và HIV-1 với CCR5.

Sự kích hoạt trong các dịch siêu natant chứa interleukin 2 (IL-2) không có lectin từ tế bào bạch cầu đơn nhân máu ngoại vi (PBL) của bệnh nhân ung thư hoặc cá nhân bình thường dẫn đến biểu hiện khả năng ly giải tế bào đối với 20 trong số 21 tế bào khối u rắn tươi kháng tự nhiên được thử nghiệm. Các tế bào khối u rắn tươi có kháng thể đối với sự ly giải do NK trung gian trong 10 tương tác PBL-khối u tự chủ của bệnh nhân và từ 17 cá nhân bình thường được thử nghiệm với 13 khối u tươi đồng loại. Cần phải nuôi cấy PBL trong IL-2 trong 2-3 ngày để biểu hiện các tế bào giết người được kích hoạt bởi lymphokine (LAK), và hoạt tính ly giải đối với nhiều mục tiêu khối u tươi và đã được nuôi cấy kháng NK phát triển song song. IL-2 tự chủ có chức năng trong sự kích hoạt LAK, cũng như các chuẩn bị IL-2 đã được tách interferon. Chiếu xạ PBL đáp ứng trước khi nuôi cấy trong IL-2 đã ngăn cản sự phát triển của LAK. Các tiền thân của LAK có mặt trong PBL đã được tách khỏi các tế bào bám dính và trong các tế bào lympho ống ngực thiếu NK, cho thấy rằng tiền thân này không phải là một đại thực bào hay một tế bào NK. Các tác nhân LAK thể hiện các dấu hiệu tế bào T được xác định bằng huyết thanh của OKT.3, Leu-1 và 4F2, nhưng không thể hiện dấu hiệu đại thực bào/NK OKM-1. Sự ly giải của các khối u rắn tươi tự chủ bởi LAK từ PBL của bệnh nhân ung thư đã được chứng minh trong 85% các tổ hợp bệnh nhân-khối u tươi. Dữ liệu của chúng tôi cung cấp bằng chứng rằng hệ thống LAK là một hiện tượng khác biệt với cả hệ thống NK hay CTL, có thể lý giải cho một số lượng lớn các khả năng ly giải không cổ điển đã được báo cáo. Vai trò sinh học của các tế bào LAK vẫn chưa được biết đến, mặc dù có đề xuất rằng các tế bào này có thể hoạt động trong sự giám sát miễn dịch chống lại các khối u rắn ở người.

Hai phương pháp đã được sử dụng để chứng minh sự hiện diện của các kháng nguyên đặc hiệu tumor trong các khối u tuyến (adenocarcinoma) của đại tràng người: (a) thỏ được tiêm chủng bằng các chiết xuất từ các khối u đại tràng tổng hợp, và huyết thanh kháng ung thư được tạo ra đã được hấp thụ bằng chiết xuất tổng hợp từ đại tràng người bình thường và các thành phần máu của người; (b) thỏ mới sinh được làm miễn dịch dung nạp với mô đại tràng bình thường ngay từ khi sinh, và sau đó được tiêm chủng với chất liệu khối u tổng hợp trong đời sống trưởng thành. Mô bình thường và mô khối u được lấy từ cùng một người hiến tặng nhằm tránh sự hiểu nhầm về kết quả do sự khác biệt về kháng nguyên đặc hiệu của từng cá nhân.

Huyết thanh chuẩn bị bởi cả hai phương pháp đã được thử nghiệm đối với các kháng nguyên bình thường và khối u bằng các kỹ thuật khuếch tán gel agar, điện di miễn dịch, ngưng kết hồng cầu, PCA và miễn dịch huỳnh quang. Hoạt tính kháng thể rõ rệt nhắm vào ít nhất hai kháng nguyên đặc hiệu tumor chất lượng đã được phát hiện trong huyết thanh được chuẩn bị bởi cả hai phương pháp và ít nhất hai kháng nguyên khối u bổ sung đã được phát hiện độc quyền trong huyết thanh được chuẩn bị theo kỹ thuật dung nạp. Liệu các kháng nguyên bổ sung này có khác biệt chất lượng so với kháng nguyên mô bình thường, hoặc chỉ tồn tại trong mô khối u với nồng độ cao hơn so với mô bình thường vẫn chưa được xác định. Hơn nữa, đã chỉ ra rằng các kháng thể đặc hiệu tumor không nhắm vào các chất bẩn vi khuẩn hoặc vào nồng độ cao bất thường của fibrin có trong nhiều mô u ác tính.

Các kết quả từ những nghiên cứu này đã kết luận rằng các chiết xuất khối u tổng hợp chứa các kháng nguyên đặc hiệu tumor không có trong mô đại tràng bình thường. Các kháng nguyên đặc hiệu tumor giống hệt cũng đã được chứng minh trong một số khối u tuyến đại tràng cá nhân thu được từ các người hiến tặng khác nhau.

Bằng cách sử dụng hai tiêu chí (a) mật độ cao của các định nghĩa miễn dịch trên bề mặt tế bào và (b) sự hiện diện của các thụ thể cho C'3 trên bề mặt tế bào để xác định các tế bào lympho lấy từ tủy xương, đã chỉ ra gián tiếp rằng tất cả hoặc ít nhất là một quần thể chủ yếu của các tế bào lympho lấy từ tuyến ức người, dưới một số điều kiện nhất định, sẽ hình thành các vòng không miễn dịch với hồng cầu cừu (SRBC). Hầu như tất cả các thymocyte được thử nghiệm từ hai người cho khác nhau đều hình thành vòng. Các vòng SRBC không được hình thành do các thụ thể miễn dịch và chỉ hình thành xung quanh các tế bào sống. Các ion hóa trị dương tích cực là cần thiết cho việc hình thành vòng vì EDTA sẽ chặn việc hình thành vòng. Natri iodoacetate cũng sẽ chặn việc hình thành vòng, điều này cho thấy sự phụ thuộc vào một con đường glyco-lytic không bị tổn thương. Việc hình thành vòng phụ thuộc vào nhiệt độ và sẽ không xuất hiện ở 37°C. Việc điều trị bằng trypsin đối với các tế bào lympho sẽ loại bỏ khả năng gắn kết với SRBC, điều này không thể được phục hồi bằng cách điều trị chúng với huyết thanh người cho tươi hoặc huyết thanh bê thai, nhưng sẽ tái xuất hiện sau khi nuôi cấy các tế bào lympho. Đề xuất rằng những vòng này được hình thành bởi một chất thụ thể được giải phóng nhanh chóng hoặc chuyển hóa trên bề mặt tế bào sống, cái mà hoạt động như một cấu trúc nhạy cảm với trypsin được sản xuất bởi chính các tế bào đó.

Một sự kiện quan trọng trong quá trình chết tế bào được lập trình (PCD) dường như là sự thay đổi màng plasma (PM) cho phép các tế bào thực bào nhận ra và bao vây những tế bào này trước khi chúng vỡ ra. Phần lớn các trường hợp PCD được quan sát ở các sinh vật bậc cao cho thấy những đặc điểm hình thái tương tự một cách nổi bật, và hình thức PCD này được gọi là apoptosis. Tình trạng thay đổi của màng PM diễn ra trên các tế bào apoptotic vẫn chưa được xác định rõ ràng. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã sử dụng một protein gắn phosphatidylserine (PS) (annexin V) như một công cụ đặc hiệu để phát hiện sự tái phân bố của phospholipid này, thường được giới hạn ở lớp màng trong của PM, trong quá trình apoptosis. Chúng tôi chứng minh rằng việc xuất hiện PS ra ngoài là một sự kiện sớm và rộng rãi trong quá trình apoptosis của nhiều loại tế bào chuột và người, bất kể kích thích ban đầu là gì, và xuất hiện trước một số sự kiện khác thường liên quan đến chế độ chết tế bào này. Chúng tôi cũng báo cáo rằng, trong các điều kiện mà các đặc điểm hình thái của apoptosis bị ngăn chặn (ức chế tổng hợp đại phân tử, biểu hiện quá mức của Bcl-2 hoặc Abl), sự xuất hiện của PS trên lớp ngoài của PM cũng bị ngăn chặn tương tự. Dữ liệu này tương thích với giả thuyết rằng việc kích hoạt một translocase PS từ trong ra ngoài là một sự kiện sớm và phổ biến trong quá trình apoptosis.

Các đốm đã được hình thành với ba loại virus poliomyelitis trên các dòng tế bào đơn lớp từ thận khỉ và tinh hoàn khỉ. Số lượng đốm tỷ lệ thuận với nồng độ của virus. Mỗi đốm do đó xuất phát từ một hạt virus đơn lẻ, được định nghĩa là đơn vị virus không thể tách rời bằng cách pha loãng. Các đốm này xuất hiện do tác động đặc hiệu của virus vì chúng bị ức chế bởi huyết thanh đặc hiệu từng loại.

Các dòng virus tinh khiết đã được thiết lập bằng cách tách biệt quần thể virus được sản xuất từ các đốm đơn lẻ. Các dòng virus này có các đặc tính hình thái, huyết thanh học và gây bệnh giống như chủng gốc.

Các nguồn virus có độ titer cao, với độ titer lên đến 7 x 10⁸ hạt forming màn mỗi ml, đã được thu nhận.

Interleukin (IL)-23 là một cytokine heterodimeric bao gồm một chuỗi p19 độc nhất và một chuỗi p40 chung được chia sẻ với IL-12. IL-12 quan trọng cho sự phát triển của tế bào T hỗ trợ (Th)1, những tế bào thiết yếu cho sự bảo vệ của cơ thể và ức chế khối u. Ngược lại, IL-23 không thúc đẩy sự phát triển của các tế bào Th1 sản xuất interferon-γ, mà là một trong những yếu tố thiết yếu cần thiết cho việc mở rộng quần thể tế bào T CD4+ gây bệnh, được đặc trưng bởi sự sản xuất của IL-17, IL-17F, IL-6 và yếu tố hoại tử u. Phân tích biểu hiện gen của các tế bào T tự phản ứng driven bởi IL-23 xác định một mô hình biểu hiện độc nhất của các cytokine proinflammatory và các yếu tố mới khác, phân biệt chúng với các tế bào T driven bởi IL-12. Sử dụng các nghiên cứu chuyển giao thụ động, chúng tôi xác nhận rằng các tế bào T CD4+ phụ thuộc vào IL-23 này có tính gây bệnh cao và thiết yếu cho việc thiết lập viêm cụ thể theo cơ quan liên quan đến tự miễn dịch hệ thần kinh trung ương.

Các tế bào T điều hòa CD4+CD25+ (Treg) đóng vai trò quan trọng trong việc duy trì sự dung nạp miễn dịch. Một câu hỏi quan trọng là liệu Treg có thể chỉ được tạo ra trong tuyến ức hay có thể phân biệt từ các tế bào T CD4+CD25− naiv ở ngoại biên. Trong bài báo này, chúng tôi trình bày những chứng cứ mới cho thấy việc chuyển đổi các tế bào T CD4+CD25− naiv ở ngoại biên thành các tế bào bất hoạt/ức chế có dấu hiệu CD25+, CD45RB−/thấp và CTLA-4 nội bào+ có thể đạt được thông qua kích thích đồng thời với thụ thể tế bào T (TCR) và yếu tố tăng trưởng chuyển đổi β (TGF-β). Mặc dù gần đây yếu tố phiên mã Foxp3 đã được chứng minh là liên quan đến sự phát triển của Treg, các tác nhân sinh lý để biểu hiện gen Foxp3 vẫn còn là một bí ẩn. TGF-β kích thích biểu hiện gen Foxp3 trong các tế bào T CD4+CD25− naiv bị thách thức bởi TCR, điều này khiến chúng chuyển sang kiểu hình tế bào T điều hòa với khả năng ức chế miễn dịch mạnh mẽ. Những tế bào bất hoạt/ức chế đã chuyển đổi này không chỉ không phản ứng với sự kích thích TCR và không sản xuất cytokine tế bào T hỗ trợ 1 hoặc 2, mà chúng còn biểu hiện TGF-β và ức chế sự phát triển bình thường của tế bào T trong ống nghiệm. Quan trọng hơn, trong một mô hình chuyển giao tế bào TCR transgenic peptide ovalbumin, các tế bào ức chế CD4+CD25+ transgenic được chuyển đổi bởi TGF-β đã tăng sinh đáp ứng với việc tiêm chủng và ức chế sự mở rộng của tế bào T CD4+ naiv đặc hiệu kháng nguyên trong cơ thể sống. Cuối cùng, trong một mô hình hen suyễn ở chuột, việc đồng quản trị các tế bào T ức chế do TGF-β gây ra đã ngăn ngừa sự sinh bệnh dị ứng do bụi nhà gây ra trong phổi.