Thay đổi proteome do trypsin gây ra trong quá trình phân lập tế bào ở tế bào động vật có vú

Journal of Biomedical Science - 2010
Hui-Ling Huang1, Hsiang Wei Hsing1, Tzu Chia Lai1, Yi Wen Chen1, Tian Ren Lee1, Hsin Tsu Chan1, Ping Lyu1, Chieh‐Lin Wu1, Ying Lu1, Szu Ting Lin1, Cheng Wen Lin2, Chih Ho Lai3, Hao Teng Chang4, Hsiu Chuan Chou5, Hong Lin Chan1
1Institute of Bioinformatics and Structural Biology & Department of Life Sciences, National Tsing Hua University, Hsinchu, Taiwan
2Department of Medical Laboratory Science and Biotechnology, China Medical University, Taichung, Taiwan
3Department of Microbiology, School of Medicine, China Medical University, Taichung, Taiwan
4Graduate Institute of Molecular Systems Biomedicine, China Medical University, Taichung, Taiwan
5Department of Applied Science, National Hsinchu University of Education, Hsinchu, Taiwan

Tóm tắt

Tóm tắt Nền tảng Các tế bào đã nuôi cấy cần được phân lập khi đạt đến đỉnh hội tụ. Để thực hiện điều này, trypsin thường được sử dụng để tách các tế bào bám dính ra khỏi bề mặt nuôi cấy. Tuy nhiên, do hoạt tính phân hủy protein của trypsin, các protein bề mặt tế bào thường bị cắt, dẫn đến sự rối loạn trong chức năng của tế bào. Phương pháp Trong nghiên cứu này, một chiến lược 2D-DIGE ở dạng ba bản sao đã được thực hiện để theo dõi sự thay đổi proteome do trypsin gây ra. Các điểm biểu hiện khác nhau đã được xác định bằng MALDI-TOF MS và được xác thực bằng phương pháp Western blot. Kết quả Có 36 protein được phát hiện là biểu hiện khác nhau trong các tế bào được điều trị bằng trypsin, và các protein có vai trò điều hòa trao đổi chất tế bào, điều chỉnh sự phát triển, vận chuyển điện tử mitochondria và bám dính tế bào đều được điều chỉnh xuống và các protein điều hòa quá trình apoptosis của tế bào được điều chỉnh lên sau khi điều trị bằng trypsin. Nghiên cứu thêm cho thấy rằng bcl-2 bị điều chỉnh xuống, trong khi p53 và p21 đều được điều chỉnh lên sau khi xử lý bằng trypsin. Kết luận Tóm lại, đây là báo cáo đầu tiên sử dụng phương pháp proteomics để nghiên cứu kỹ lưỡng các thay đổi sinh lý tế bào do trypsin gây ra và cung cấp thông tin cho các nhà nghiên cứu trong việc thiết kế thí nghiệm của họ.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

Peralta SA, Knudsen KA, Tecson-Miguel A, McBrearty FX, Han AC, Salazar H: Expression of E-cadherin and N-cadherin in surface epithelial-stromal tumors of the ovary distinguishes mucinous from serous and endometrioid tumors. Hum Pathol. 1997, 28: 734-739. 10.1016/S0046-8177(97)90184-2.

Rosivatz E, Becker I, Bamba M, Schott C, Diebold J, Mayr D, Hofler H, Becker KF: Neoexpression of N-cadherin in E-cadherin positive colon cancers. Int J Cancer. 2004, 111: 711-719. 10.1002/ijc.20317.

Kuphal S, Bosserhoff AK: Influence of the cytoplasmic domain of E-cadherin on endogenous N-cadherin expression in malignant melanoma. Oncogene. 2006, 25: 248-259. 10.1038/sj.onc.1209508.

Lee JW, Soung YH, Kim SY, Park WS, Nam SW, Kim SH, Lee JY, Yoo NJ, Lee SH: ERBB2 kinase domain mutation in a gastric cancer metastasis. APMIS. 2005, 113: 683-687. 10.1111/j.1600-0463.2005.apm_284.x.

Bekaii-Saab T, Williams N, Plass C, Calero MV, Eng C: A novel mutation in the tyrosine kinase domain of ERBB2 in hepatocellular carcinoma. BMC Cancer. 2006, 6: 278-10.1186/1471-2407-6-278.

Timms JF, Cramer R: Difference gel electrophoresis. Proteomics. 2008, 8: 4886-4897. 10.1002/pmic.200800298.

Westermeier R, Scheibe B: Difference gel electrophoresis based on lys/cys tagging. Methods Mol Biol. 2008, 424: 73-85. full_text.

Marouga R, David S, Hawkins E: The development of the DIGE system: 2D fluorescence difference gel analysis technology. Anal Bioanal Chem. 2005, 382: 669-678. 10.1007/s00216-005-3126-3.

Lai TC, Chou HC, Chen YW, Lee TR, Chan HT, Shen HH, Lee WT, Lin ST, Lu YC, Wu CL, Chan HL: Secretomic and Proteomic Analysis of Potential Breast Cancer Markers by Two-Dimensional Differential Gel Electrophoresis. J Proteome Res. 2010, 9: 1302-1322. 10.1021/pr900825t.

Chou HC, Chen YW, Lee TR, Wu FS, Chan HT, Lyu PC, Timms JF, Chan HL: Proteomics study of oxidative stress and Src kinase inhibition in H9C2 cardiomyocytes: A cell model of heart ischemia reperfusion injury and treatment. Free Radic Biol Med. 2010,

Chan HL, Gaffney PR, Waterfield MD, Anderle H, Peter MH, Schwarz HP, Turecek PL, Timms JF: Proteomic analysis of UVC irradiation-induced damage of plasma proteins: Serum amyloid P component as a major target of photolysis. FEBS Lett. 2006, 580: 3229-3236. 10.1016/j.febslet.2006.05.002.

Chan HL, Gharbi S, Gaffney PR, Cramer R, Waterfield MD, Timms JF: Proteomic analysis of redox- and ErbB2-dependent changes in mammary luminal epithelial cells using cysteine- and lysine-labelling two-dimensional difference gel electrophoresis. Proteomics. 2005, 5: 2908-2926. 10.1002/pmic.200401300.

Chan HL, Chou HC, Duran M, Gruenewald J, Waterfield MD, Ridley A, Timms JF: Major role of EGFR and SRC kinases in promoting oxidative stress-dependent loss of adhesion and apoptosis in epithelial cells. J Biol Chem. 2009, 285: 4307-4318. 10.1074/jbc.M109.047027.

Shin BK, Wang H, Yim AM, Le Naour F, Brichory F, Jang JH, Zhao R, Puravs E, Tra J, Michael CW, Misek DE, Hanash SM: Global profiling of the cell surface proteome of cancer cells uncovers an abundance of proteins with chaperone function. J Biol Chem. 2003, 278: 7607-7616. 10.1074/jbc.M210455200.

Jang JH, Hanash S: Profiling of the cell surface proteome. Proteomics. 2003, 3: 1947-1954. 10.1002/pmic.200300563.

Mayrhofer C, Krieger S, Allmaier G, Kerjaschki D: DIGE compatible labelling of surface proteins on vital cells in vitro and in vivo. Proteomics. 2006, 6: 579-585. 10.1002/pmic.200500104.

Barazi HO, Zhou L, Templeton NS, Krutzsch HC, Roberts DD: Identification of heat shock protein 60 as a molecular mediator of alpha 3 beta 1 integrin activation. Cancer Res. 2002, 62: 1541-1548.

Tsujimoto Y, Shimizu S: The voltage-dependent anion channel: an essential player in apoptosis. Biochimie. 2002, 84: 187-193. 10.1016/S0300-9084(02)01370-6.

Thông tin
Thông tin xuất bản

Journal of Biomedical Science

Thông tin tác giả