Chuyển đổi tế bào nấm men nguyên vẹn được điều trị bằng cation kiềm
Tóm tắt
Các tế bào nấm men nguyên vẹn được điều trị bằng các cation kiềm đã tiếp nhận DNA plasmid. Li+, Cs+, Rb+, K+ và Na+ đều có hiệu quả trong việc gây ra khả năng chuyển đổi. Các điều kiện để chuyển đổi Saccharomyces cerevisiae D13-1A với plasmid YRp7 đã được nghiên cứu một cách chi tiết với CsCl. Thời gian ấp tối ưu là 1 giờ, và nồng độ tế bào tối ưu là 5 x 10(7) tế bào/ml. Nồng độ tối ưu của Cs+ là 1.0 M. Hiệu suất chuyển đổi tăng khi nồng độ DNA plasmid tăng lên. Polyethylen glycol là hoàn toàn cần thiết. Nhiệt độ và các polyamine hoặc protein cơ bản khác nhau đã kích thích sự tiếp nhận DNA plasmid. Ngoài DNA hình tròn, DNA plasmid dạng thẳng cũng đã được tế bào nấm men điều trị bằng Cs+ tiếp nhận, mặc dù hiệu suất tiếp nhận đã giảm đáng kể. Hiệu suất chuyển đổi với Cs+ hoặc Li+ tương đương với các phương pháp protoplast truyền thống đối với một plasmid chứa ars1, mặc dù không phải với các plasmid chứa nguồn gốc phái sinh 2 microns.
Từ khóa
Tài liệu tham khảo
Beach , D. , and P. Nurse . 1981 . High-frequency transformation of the fission yeast Schizosaccharomyces pombe . Nature (London) 290 : 140 - 142 .
Cameron , J. R. , P. Phillppsen , and R. W. Davis . 1977 . Analysis of chromosomal integration and deletions of yeast plasmids . Nucleic Acids Res. 4 : 1429 - 1448 .
Ferenczy , L. , and A. Maraz . 1977 . Transfer of mitochondria by protoplast fusion in Saccharomyces cerevisiae . Nature (London) 268 : 524 - 525 .
Grhdus , L. 1980 . Nucleic acid transport driven by ion gradient across cell membrane . FEBS Lett. 113 : 1 - 10 .
HelUng , R. B. , H. M. Goodman , and H. W. Boyer . 1974 . Analysis of endonuclease R * EcoRI fragments of DNA from lambdoid bacteriophages and other viruses by agarose-gel electrophoresis . J. Virol. 14 : 1235 - 1244 .
Hlnnen , A. , J. B. Hicks , and G. R. Flnk . 1978 . Transformation of yeast . Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 75 : 1929 - 1933 .
Kao , K. N. , and M. R. Mlchayluk . 1974 . A method for high frequency intergeneric fusion of plant protoplasts . Planta 115 : 355 - 367 .
Kimura , A. , K. Arima , and K. Murata . 1981 . Biofunctional change in yeast cell surface on treatment with Triton X-100 . Agric. Biol. Chem. 45 : 2627 - 2629 .
Kimura , A. , and M. Morita . 1975 . Fermentative formation of CDP-choline by intact cells of yeast: Saccharomyces carlsbergen.sis (IFO 0641) treated with a detergent, Triton X-100 . Agric. Biol. Chem. 39 : 1469 - 1474 .
Mandel , M. , and A. Hig . 1970 . Calcium-dependent bacteriophage DNA infection . J. Mol. Biol. 53 : 159 - 162 .
Meyers , J. A. , D. Sanchez , L. P. Elwell , ad S. Falkow . 1976 . Simple agarose gel electrophoretic method for the identification and characterization of plasmid deoxyribonucleic acid . J. Bacteriol. 127 : 1529 - 1537 .
Naharl K. 1979. DNA kumikae gijutsu p. 162-163. In K. Sakaguchi and M. Okanishi (ed.) Bunshi ikushu to oyo biseibtsu. Kodansha Tokyo. (In Japanese.)
Struhl ,d, D.T. Dhdecmb, S. Scherer , and R. W. Davis . 1979 . High-frequwecy transformation of yeast: autonomous replication 'f hybrid DNA molecules . Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 75 : 1929 - 1933 .
Sinkl M. ad I. Tanabe. 1976. Uptake of single-strand bacteriophage DNA by isolated tobacco protoplasts. Z. PManzenphysiol. 7&21-433.
va Sollngen ,- P. , aig L. B. van der Plaat . 1977 . Fusion of yeast spheroplasts . J. Bacteriol. 130 : 946 - 947 .