N. Juntti1,2,3, B. Larsson1,2,3, Caroline Fossum1,2,3
1Department of Cattle and Sheep Diseases, Swedish University of Agricultural Sciences, S-75007, Uppsala, Sweden
2Department of Virology, The National Veterinary Institute and Department of Cattle and Sheep Diseases, Swedish University of Agricultural Sciences
3Department of Virology, The National Veterinary Institute, Biomedicum, S-75123 Uppsala, Sweden
Tóm tắt
SummaryTwo ELISA techniques were developed for the detection of antibodies to bovine viral diarrhoea virus (BVDV), an indirect and a competitive ELISA. The coating antigen was prepared from virus harvests which were 10 to 100 times larger than usual. This was achieved by culturing the cells in a growth medium with foetal calf serum devoid of IgG. The harvested BVDV was solubilized with detergent to increase the accessibility of antigens. By these modifications, the amount of antigen produced from one 120 cm2 bottle was sufficient to coat at least 50 microtitre plates.The indirect ELISA was governed by a monoclonal antibody (MAb) to bovine IgG and the competitive ELISA by a MAb to BVDV. Preliminary results indicate that this latter MAb binds to a 20 K protein, present in both cytopathogenic and non‐cytopathogenic strains of BVDV.Cattle sera were examined from the field as well as sera collected from a heifer following natural infection. There was a good correlation between the results obtained by the two ELISA techniques and in serum neutralization test. For routine examination of bovine serum samples the indirect ELISA applying a MAb to bovine IgG is recommended.ZusammenfassungZwei ELISA‐Techniken wurden zum Nachweis von Antikörpern gegen bovines Virusdiarrhoe‐Virus (BVDV) entwickelt, ein indirekter und ein kompetitiver ELISA. Durch Kultur von Zellen in Wachstumsmedium mit IgG‐freien FKS wurden 10‐ bis 100fach höhere Virusausbeuten erzielt, die zur Beschichtung von Platten verwendet wurden. Das geerntete BVDV wurde mit Detergens behandelt, um die Antigenverfügbarkeit zu verbessern. Durch diese Modifikationen war die Ernte aus einer 120cm2‐Flasche ausreichend, um mindestens 50 Mikrotiterplatten zu beschichten.Der indirekte ELISA benützt einen monoklonalen Antikörper (MAK) gegen bovines IgG und der kompetitive ELISA einen MAK gegen BVDV. Vorläufige Ergebnisse deuten darauf hin, daß der letztere MAK an ein 20 K Protein bindet, das sowohl in cytopathogenen als auch in nichtcytopathogenen BVDV‐Stämmen vorhanden ist. Untersucht wurden Rinderseren aus dem Feld sowie Seren einer Färse mit natürlicher BVDV‐Infektion. Die Ergebnisse der beiden ELISA‐Techniken zeigten eine gute Korrelation untereinander und mit dem Serum‐Neutralisationstest. Für die Routineuntersuchung von Rinderseren wird der indirekte ELISA mit dem MAK gegen bovines IgG empfohlen.
