Phát hiện đồng thời và phân loại chủng Mycobacterium tuberculosis để chẩn đoán và dịch tễ học

Việc sử dụng rộng rãi phương pháp đa hình chiều dài đoạn hạn chế DNA (RFLP) để phân biệt các chủng của Mycobacterium tuberculosis nhằm theo dõi sự lây truyền của bệnh lao đã gặp khó khăn do cần phải nuôi cấy vi sinh vật phát triển chậm này và do mức độ phức tạp kỹ thuật cần thiết để thực hiện phân loại RFLP. Chúng tôi đã phát triển một phương pháp đơn giản cho phép phát hiện và phân loại M. tuberculosis trong các mẫu lâm sàng một cách đồng thời, giảm thời gian từ khi nghi ngờ bệnh đến khi phân loại từ 1 hoặc vài tháng xuống còn 1 đến 3 ngày. Phương pháp này dựa trên tính đa hình của locus chromosomal DR, chứa một số lượng biến đổi các lặp lại trực tiếp ngắn xen kẽ với các khoảng cách không lặp lại. Phương pháp được gọi là oligotyping khoảng cách hoặc "spoligotyping" vì nó dựa trên các mô hình lai phụ thuộc vào chủng của DNA được khuếch đại in vitro với nhiều oligonucleotide khoảng cách. Hầu hết các mẫu lâm sàng đã thử nghiệm cho thấy các mô hình lai độc nhất, trong khi các chủng có ổ dịch chia sẻ cùng một spoligotype. Các loại thu được từ việc kiểm tra trực tiếp các mẫu lâm sàng là tương đương với các loại thu được bằng cách sử dụng DNA từ M. tuberculosis được nuôi cấy. Nghiên cứu sơ bộ mới này cho thấy phương pháp mới có thể là một công cụ hữu ích để nhanh chóng tiết lộ các trường hợp dịch bệnh liên quan trong cộng đồng, trong bệnh viện hoặc các tổ chức khác và để theo dõi sự lây truyền của M. tuberculosis kháng đa thuốc. Đáng ngạc nhiên, spoligotyping được phát hiện có khả năng phân biệt M. bovis với M. tuberculosis, một sự phân biệt thường khó thực hiện bằng các phương pháp truyền thống.