Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Sự kết hợp của serotonin trong não chuột. Một số khía cạnh phương pháp học
Tóm tắt
Việc kết dính của (3H)5-hydroxytryptamine ([3H]5-HT, serotonin) với các homogene hóa thô từ não của ba dòng chuột khác nhau đã được nghiên cứu. Các dòng chuột C57/BL, DBA và BALB không cho thấy sự khác biệt đáng kể trong các đặc điểm kết dính, với giá trị Kd khoảng 6–7 nM và Bmax 270–310 fmoles/mg protein. Nhiều khía cạnh phương pháp đã được điều tra và thấy là quan trọng cho thử nghiệm kết dính. Sự hiện diện của acid ascorbic (5.7 mM) đã gây ra sự gia tăng đáng kể về Bmax lên đến 30% mà không có sự thay đổi nào trong các giá trị Kd. Sự gia tăng này dường như là do sự giảm bớt trong kết dính không đặc hiệu thay vì là do sự gia tăng tổng thể của serotonin. Sự hiện diện của một chất ức chế MAO-A cụ thể, clorgyline (10μM), trong quá trình thử nghiệm đã dẫn đến sự giảm đáng kể Bmax khoảng 20% mà không có sự thay đổi nào trong độ tương thích với serotonin khi sử dụng mô đã được đông lạnh. Ít hơn 2% serotonin được thêm vào đã được chuyển hóa trong quá trình kết dính mà không có clorgyline. Do đó, sự giảm khả năng kết dính do clorgyline có thể là do hiệu ứng chặn không cạnh tranh của cấu trúc kết dính serotonin. Những kết quả này cho thấy rằng việc sử dụng các chất ức chế MAO trong các thử nghiệm kết dính (3H)5-HT trên mô đông lạnh, thay vì cần thiết, có thể ảnh hưởng tiêu cực đến kết quả. Việc bảo quản não ở -70° hoặc bảo quản sau khi chết của các động vật trong 60 giờ ở 4° không dẫn đến những thay đổi rõ rệt trong các đặc điểm kết dính (3H)5-HT.
Từ khóa
#serotonin #(3H)5-hydroxytryptamine #MAO- A inhibitor #chuột #phương pháp nghiên cứuTài liệu tham khảo
Bennet, J. P., Snyder, S. H.: Serotonin and lysergic acid dietylamide binding in rat brain membranes: relationship to post-synaptic serotonin receptors. Mol. Pharmacol.12, 373–389 (1976).
Creese, I., Snyder, S. H.:3H-spiroperidol labels serotonin receptors in rat cerebral cortex and hippocampus. Eur. J. Pharmacol.49, 201–202 (1978).
Dehlin, E., Marcusson, J., Fowler, C. J., Winblad, B.: The binding of (3H)5-hydroxytryptamine to homogenates of human brain. J. Neural Transm.54, 91–103 (1982).
Eckert, A. B., Gottfries, C. G., Knorring, L., Oreland, L., Wiberg, Å., Winblad, B.: Brain and platelet monoamine oxidase in mental disorders. 1. Schizophrenics and cycloid psychotics. Progr. in Neuropsychopharmacol.4, 57–80 (1980).
Fillion, M. B. G., Rouselle, J. C., Fillion, M. P., Beaudoin, D. M., Goiny, M. R., Deniau, J. M., Jacob, J. J.: High-affinity binding of (3H)5-hydroxytryptamine to brain synaptosomal membranes: comparison with (3H)lysergic acid dietylamide binding. Mol. Pharmacol.14, 50–59 (1977).
Fillion, G., Fillion, M. P.: Transitional states of the neuronal serotonergic site. Eur. J. Pharmacol.65, 109–112 (1980).
Fowler, C. J., Oreland, L., Callingham, B. A.: The acetylenic monoamine oxidase inhibitors clorgyline, deprenyl, pargyline and J-508: their properties and applications). J. Pharm. Pharmacol.33, 341–347 (1981 a).
Fowler, C. J., Nordqvist, A., Oreland, L., Saramies, A.: Monoamine oxidase activity in ox, elk and reindeer brains. Comp. Biochem. Physiol.68 C, 145–149 (1981 b).
Fowler, C. J., Tipton, K. F.: Deamination of 5-hydroxytryptamine by both forms of monoamine oxidase in the rat brain. J. Neurochem.38, 733–736 (1982).
Hall, H., Thor, L.: Evaluation of a semiautomatic filtration technique for receptor binding studies. Life Sci.24, 2293–2300 (1979).
Hamon, M., Nelson, D. L., Herbet, A., Glowinski, J.: Multiple receptors for serotonin in the rat brain. In: Receptors for Neurotransmitters and Peptide Hormones (Pepeu, G., Kuhar, M. J., Enna, S. J., eds.), pp. 223–233. New York: Raven Press. 1980.
Heltzel, J. A., Boehme, D. H., Vogel, W. H.: Serotonin binding to different regions of human brain. Brain Res.204, 451–454 (1981).
Kienzl, E., Riederer, P., Jellinger, K., Wesemann, W.: Transitional states of central serotonin receptors in Parkinsons's disease. J. Neural Transm.51, 113–122 (1981).
Klotz, I. M.: Numbers of receptor sites from Scatchard graphs: facts and fantasies. Science217, 1247–1249 (1982).
Lefkowitz, R. J., Williams, L. T.: Catecholamine binding to theβ-adrenergic receptor. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A.74, 515–519 (1977).
Leslie, F. M., Dunlap, III, C. E., Cox, B. M.: Ascorbate decreases ligand binding to neurotransmitter receptors. J. Neurochem.34, 219–221 (1980).
Nelson, D. L., Herbet, A., Bourgoin, S., Glowinski, J., Hamon, M.: Characteristics of central 5-HT receptors and their adaptive changes following intracerebral 5, 7-dihydroxytryptamine administration in the rat. Mol. Pharmacol.14, 983–995 (1978).
Oreland, L., Fowler, C. J., Wiberg, Å.: Titration of monoamine-oxidase -A and -B and its clinical application. In: Monoamine Oxidase Inhibitors — The State of Art (Youdim, M., Paykel, E. S., eds), pp. 77–81. New York: Wiley. 1981.
Oreland, L., Fowler, C. J.: Brain and platelet monoamine oxidase activities in relation to central monoaminergic activity in mice and man. In: Monoamine Oxidase — Basic and Clinical Frontiers (Kamijo, K., Usdin, E., Nagatsu, T., eds.), pp. 312–320. Amsterdam: Excerpta Medica. 1982.
Pedigo, N. W., Yamamura, H. I., Nelson, D. L.: Discrimination of multiple (3H)5-hydroxytryptamine binding sites by the neuroleptic spiperone in rat brain. J. Neurochem.36, 220–226 (1981).
Peroutka, S. I., Snyder, S. H.: Multiple serotonin receptors: differential binding of (3H)5-hydroxytryptamine, (3H)lysergic acid dietylamide and (3H)spiroperidol. Mol. Pharmacol.16, 687–699 (1979).
Seeman, P., Chau-Wong, M., Tedesco, J., Wong, K.: Brain receptors for antipsychotic drugs and dopamine: direct binding assays. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A.72, 4376–4380 (1975).
Weiner, N., Martin, C., Wesemann, W., Riederer, P.: Effect of postmortem storage on synaptic 5-HT binding and uptake in mammalian brain. J. Neural Transm.46, 253–262 (1979).
Weiner, N., Arold, N., Wesemann, W.: Possible hazards in serotonin binding assays in human and rat brain: effects of ascorbate, pargyline and buffer concentration. J. Neurosci. Meth.5, 41–45 (1982).