Các hệ gen tái tổ hợp biểu hiện enzyme chloramphenicol acetyltransferase trong tế bào động vật có vú.

Chúng tôi đã xây dựng một loạt các hệ gen tái tổ hợp, nhằm điều khiển sự biểu hiện của enzyme chloramphenicol acetyltransferase (CAT) trong các tế bào động vật có vú. Hệ gen tái tổ hợp nguyên mẫu trong loạt này, pSV2-cat, bao gồm gen beta-lactamase và khởi đầu cho sự tái bản từ pBR322 nối với vùng phiên mã sớm của virus khỉ 40 (SV40) mà vào đó các trình tự mã hóa cho CAT đã được chèn vào. Mức độ CAT tích lũy có thể đo lường dễ dàng trong vòng 48 giờ sau khi DNA pSV2-cat được đưa vào tế bào thận khỉ xanh châu Phi CV-1. Do không có hoạt tính CAT nội sinh trong CV-1 hoặc các tế bào động vật có vú khác, và do có sẵn các xét nghiệm nhanh, nhạy cảm cho hoạt tính CAT, nên các hệ gen tái tổ hợp này cung cấp một hệ thống độc đáo thuận tiện để giám sát sự biểu hiện của DNA ngoại lai trong các tế bào nuôi cấy mô. Để chứng minh tính hữu dụng của hệ thống này, chúng tôi đã xây dựng các dẫn xuất của pSV2-cat mà từ đó một phần hoặc toàn bộ vùng promoter SV40 đã bị loại bỏ. Việc xóa một bản sao của trình tự lặp 72 cặp bazơ trong vùng promoter SV40 không gây giảm đáng kể trong việc tổng hợp CAT trong các tế bào thận khỉ; tuy nhiên, việc xóa thêm 50 cặp bazơ từ bản sao thứ hai của các trình tự lặp đã làm giảm tổng hợp CAT xuống còn 11% mức của dạng hoang dã. Chúng tôi cũng đã xây dựng một hệ gen tái tổ hợp, pSV0-cat, trong đó toàn bộ vùng promoter SV40 đã bị loại bỏ và một vị trí HindIII độc nhất đã được thay thế để chèn các trình tự promoter khác.