Quy trình nhanh chóng để phát hiện và tách biệt plasmid lớn và nhỏ

Journal of Bacteriology - Tập 145 Số 3 - Trang 1365-1373 - 1981
Clarence I. Kado, S T Liu

Tóm tắt

Các quy trình được mô tả để phát hiện và tách biệt plasmid có kích thước khác nhau (2,6 đến 350 megadalton) được chứa trong các loài Agrobacterium, Rhizobium, Escherichia, Salmonella, Erwinia, Pseudomonas và Xanthomonas. Phương pháp này sử dụng các đặc điểm phân tử của axit deoxyribonucleic vòng kín (DNA) liên kết covalent được giải phóng khỏi tế bào trong các điều kiện làm biến tính DNA nhiễm sắc thể bằng cách sử dụng natri dodecyl sulfate kiềm (pH 12,6) ở nhiệt độ cao. Protein và các mảnh tế bào đã được loại bỏ bằng cách chiết xuất bằng phenol-chloroform. Dưới các điều kiện này, nồng độ DNA nhiễm sắc thể đã được giảm hoặc loại bỏ. Dịch chiết tinh khiết được sử dụng trực tiếp cho phân tích điện di. Những quy trình này cũng cho phép tách biệt có chọn lọc DNA plasmid có thể được sử dụng trực tiếp trong sự dịch chuyển, phân tích endonuclease hạn chế, chuyển đổi và thí nghiệm nhân bản DNA.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo