Phương pháp nhanh chóng và đơn giản để tinh chế axit nucleic

Chúng tôi đã phát triển một quy trình đơn giản, nhanh chóng và đáng tin cậy cho việc tinh chế quy mô nhỏ DNA và RNA từ, ví dụ, huyết thanh người và nước tiểu. Phương pháp này dựa trên đặc tính phân hủy và bất hoạt nuclease của tác nhân chaotropic guanidinium thiocyanate cùng với các đặc tính liên kết axit nucleic của các hạt silica hoặc diatom trong sự hiện diện của tác nhân này. Bằng việc sử dụng các hạt silica được phân đoạn kích thước, các axit nucleic (DNA vòng kín liên kết cộng hóa trị, DNA vòng thoải mái, DNA chuỗi đôi thẳng, DNA đơn chuỗi và rRNA) có thể được tinh chế từ 12 mẫu khác nhau trong thời gian chưa đến 1 giờ và được thu hồi trong bình phản ứng ban đầu. DNA tinh chế (dù đã bị cắt xén đáng kể) là một nền tảng tốt cho các endonuclease giới hạn và DNA ligase và được thu hồi với sản lượng cao (thường trên 50%) từ mức picogram đến microgram. rRNA đồng tinh chế được thu hồi gần như không bị phân hủy. Việc thay thế các hạt silica được phân đoạn kích thước bằng diatom (các tường tế bào hóa thạch của tảo đơn bào) đã cho phép tinh chế một lượng nhỏ DNA gen, DNA plasmid và rRNA từ các nguồn chứa tế bào phong phú, như được minh chứng đối với vi khuẩn gram âm gây bệnh. Trong bài viết này, chúng tôi trình bày các thí nghiệm tiêu biểu minh họa một số đặc điểm của quy trình, có thể có ứng dụng rộng rãi trong vi sinh vật lâm sàng.