Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Phân tích trình điều khiển gen bằng chiến lược đột biến bão hòa
Tóm tắt
Sự biểu hiện và điều tiết gen được điều chỉnh bởi các trình tự DNA, trong hầu hết các trường hợp, ngay phía trên các trình tự mã hóa bằng cách tuyển mộ các yếu tố phiên mã, các quy định và một polymerase RNA theo cách có định hướng không gian. Vài nucleotide trong một trình điều khiển tiếp xúc với các protein đã liên kết. Tập hợp tối thiểu các nucleotide có thể tuyển mộ một yếu tố protein được gọi là phần tử cis-acting. Bài báo này đề cập đến một chiến lược đột biến mạnh mẽ có thể được sử dụng để xác định các phần tử cis-acting ở cấp độ phân tử. Các chi tiết kỹ thuật bao gồm thiết kế mồi, đột biến bão hòa, xây dựng thư viện trình điều khiển, phân tích kiểu hình, phân tích dữ liệu và diễn giải sẽ được thảo luận.
Từ khóa
#biểu hiện gen #điều tiết gen #yếu tố phiên mã #đột biến bão hòa #trình điều khiển genTài liệu tham khảo
Baliga NS, DasSarma S. Saturation mutagenesis of the TATA box and upstream activator sequence in the haloarchaeal bop gene promoter. J Bacteriol. 1999;181(8):2513–2518.
Baliga NS, Dassarma S. Saturation mutagenesis of the haloarchaeal bop gene promoter: identification of DNA supercoiling sensitivity sites and absence of TFB recognition element and UAS enhancer activity. Mol Microbiol. 2000;36(5):1175–1183.
Barik S, Galinski MS. “Megaprimer” method of PCR: increased template concentration improves yield. Biotechniques. 1991;10(4):489–490.
Blattner FR. Direct amplification of the entire ITS region from poorly preserved plant material using recombinant PCR. Biotechniques. 1999;27(6):1180–1186.
Chrzanowska-Lightowlers ZM, Temperley RJ, McGregor A, Bindoff LA, Lightowlers RN. Conversion of a reporter gene for mitochondrial gene expression using iterative mega-prime PCR. Gene. 1999;230(2):241–247.
Colgan J, Manley JL. Cooperation between core promoter elements influences transcriptional activity in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 1995;92(6):1955–1959.
Corona V, Aracri B, Kosturkova G, et al. Regulation of a carotenoid biosynthesis gene promoter during plant development. Plant J. 1996;9(4):505–512.
Danner S, Soppa J. Characterization of the distal promoter element of halobacteria in vivo using saturation mutagenesis and selection. Mol Microbiol. 1996;19(6): 1265–1276.
Hain J, Reiter WD, Hudepohl U, Zillig W. Elements of an archaeal promoter defined by mutational analysis. Nucleic Acids Res. 1992;20(20):5423–5428.
Patenge N, Haase A, Bolhuis H, Oesterhelt D. The gene for a halophilic beta-galactosidase (bgaH) of Haloferax alicantei as a reporter gene for promoter analyses in Halobacterium salinarum. Mol Microbiol. 2000;36(1):105–113.
Palmer JR, Daniels CJ. In vivo definition of an archaeal promoter. J Bacteriol. 1995;177 (7):1844–1849.
Reiter WD, Hudepohl U, Zillig W. Mutational analysis of an archaebacterial promoter: essential role of a TATA box for transcription efficiency and start-site selection in vitro. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990;87(24):9509–9513.
Yang CF, Kim JM, Molinari E, DasSarma S. Genetic and topological analyses of the bop promoter of Halobacterium halobium: stimulation by DNA supercoiling and non-B-DNA structure. J Bacteriol. 1996;178 (3):840–845.