Sabine Pestel1, Hendrik Peil2, Steffi Knoll Machado3, Philipp Claar2, Elmar Raquet4, Padmapriya Ponnuswamy2, Marcel Mischnik4, Oliver Ghobrial5, Eva Herzog6
1Pharmacology Toxicology, CSL Behring GmbH, Marburg, Germany
2CSL Behring Innovation GmbH, Marburg, Germany
3CSL Behring Innovation GmbH, Marburg, Gibraltar
4CSL Behring Innovation GmbH, Marburg, DEU
5CSL Ltd., King of Prussia
6CSL Behring LLC, King of Prussia
Tóm tắt
Tóm tắt
Giới thiệu: Rối loạn chảy máu lặn liên kết với nhiễm sắc thể X Hemophilia B do đột biến trong gen yếu tố đông máu (F) IX gây ra, dẫn đến mất chức năng một phần hoặc hoàn toàn. Điều trị dự phòng bằng cách thay thế FIX kéo dài là một lựa chọn hấp dẫn cho bệnh nhân để giảm tần suất sử dụng và ngăn ngừa chảy máu. Các liệu pháp FIX tái tổ hợp mới như FIX fusion với albumin (rFIX-FP) hoặc FIX fusion với Fc (rFIX-Fc) cho phép thời gian bán hủy lâu hơn trong vòng tuần hoàn và do đó ít phải tiêm hơn, so với FIX không liên kết (rFIX). Các nghiên cứu trên chuột FIX knockout (KO) đã được tiến hành để mô tả tác động của các sửa đổi này lên các thuộc tính dược động học (PK) và dược lực học (PD) của các sản phẩm FIX tái tổ hợp khác nhau.
Phương pháp: Dược động học: Các FIX tái tổ hợp được tiêm tĩnh mạch với liều 25 nmol/kg (tương ứng với ~175-400 IU/kg hoạt tính đông máu FIX) cho chuột FIX KO. Mẫu máu được thu thập bắt đầu từ 5 phút và kéo dài lên đến 336 giờ. Mức FIX trong huyết tương được đo bằng phương pháp ELISA với các kháng thể đối kháng với FIX người. PK được đánh giá bằng phân tích không thuộc về kho. Phân phối sinh học: Các FIX tái tổ hợp gắn nhãn 3H được tiêm tĩnh mạch với liều 200 IU/kg cho chuột FIX KO. Mức độ trong huyết tương và phân phối trong các cơ quan được định lượng bắt đầu từ 15 phút và kéo dài đến 240 giờ. Dược lực học: Chuột FIX KO được điều trị tĩnh mạch bằng 50 IU/kg hoạt tính đông máu FIX (tác động danh nghĩa hoặc có gán nhãn) của các sản phẩm rFIX khác nhau tại 24, 72, 120, 168 và 336 giờ trước khi xác định thời gian chảy máu và tổng lượng máu mất trong mô hình chảy máu bằng kẹp đuôi. Ngay khi bị thương, đầu đuôi được ngâm trong dung dịch muối sinh lý (0.9%), giữ ở nhiệt độ thân nhiệt sinh lý của chuột. Thời gian để cầm máu được xác định là thời gian cho đến khi chảy máu ngừng trong ít nhất 2 phút. Khối lượng tổng lượng máu mất được tính bằng cách đo hemoglobin có trong dung dịch muối sinh lý ở cuối thí nghiệm.
Kết quả: Các hồ sơ PK khác biệt được quan sát thấy cho ba phân tử FIX, trong đó rFIX và rFIX-Fc thể hiện một giai đoạn phân phối nhanh ban đầu từ huyết tương, trong khi rFIX-FP cho thấy một hồ sơ loại bỏ đơn pha kéo dài đến 120 giờ sau khi tiêm (p.a.). Trong giai đoạn cuối, mức rFIX có thể định lượng trong tối đa 48 giờ p.a., trong khi cả hai; rFIX-FP và rFIX-Fc đều có thể đo được trong huyết tương lên đến 240 giờ p.a. Theo đó, tổng mức độ phơi nhiễm AUC 0-inf được xếp theo thứ tự sau: rFIX-FP > rFIX-Fc > rFIX.
Trong nghiên cứu phân phối sinh học, một hồ sơ PK huyết tương tương tự được xác định. Với độ nhạy của phương pháp phóng xạ, một mức độ phơi nhiễm ổn định đã được quan sát thấy cho rFIX-Fc, và ở mức thấp hơn cho rFIX, trong khi đó rFIX-FP tiếp tục thể hiện hành vi thanh thải huyết tương đơn pha. Mức độ phơi nhiễm của rFIX-FP trong không gian ngoài mạch (EVS) thấp hơn so với các sản phẩm FIX khác. Điều này phù hợp với các thể tích phân phối (Vss và Vz) mà cao nhất cho rFIX-Fc (AUC xếp hạng rFIX-Fc > rFIX > rFIX-FP).
Hiệu quả cầm máu FIX trong mô hình kẹp đuôi tương đương cho cả 3 FIX tại các thời điểm sớm nhưng đã phân kỳ tại các thời điểm muộn sau khi tiêm. Tổng lượng máu mất và đo thời gian chảy máu quay trở về mức cơ bản trong vòng 168 giờ đối với rFIX và rFIX-Fc, trong khi nhóm rFIX-FP duy trì hoạt động cầm máu mạnh mẽ lên đến 336 giờ. Trái ngược với mức độ phơi nhiễm mô thấp nhất của rFIX-FP, AUC huyết tương cho rFIX-FP cao nhất, so với FIX-Fc hoặc FIX. Theo đó, hiệu quả theo thời gian cũng cao nhất cho rFIX-FP, gợi ý rằng mức độ phơi nhiễm mô có thể không phải là yếu tố chính điều khiển hoạt động cầm máu.
Kết luận: Các sản phẩm FIX khác nhau thể hiện hành vi PK và PD khác nhau. Hồ sơ PK trong huyết tương của rFIX-FP gợi ý sự phân phối mô thấp hơn so với rFIX-Fc và rFIX, điều này đã được xác nhận trong nghiên cứu phân phối mô. Mặc dù khả năng thoát ra ngoài mô hạn chế, rFIX-FP thể hiện hoạt động cầm máu vượt trội và kéo dài trong mô hình chảy máu bằng kẹp đuôi chuột FIX KO. rFIX và rFIX-Fc cho thấy hành vi phân phối mô tương đương, với khả năng thoát ra ngoài EVS mạnh mẽ. Mặc dù có thời gian bán hủy lâu nhất và mức độ phơi nhiễm tổng thể (huyết tương và mô) cao nhất ở chuột, rFIX-Fc mất hoạt động cầm máu trong mô hình kẹp đuôi nhanh hơn đáng kể so với rFIX-FP. Do đó, hiệu quả cầm máu cao nhất cho FIX-FP, sản phẩm có thể tích phân phối thấp nhất. Kết quả do đó gợi ý rằng EVS không phải là yếu tố xác định chính cho hiệu quả của FIX in vivo.
Công bố thông tin
Pestel: CSL Behring Innovation GmbH: Công việc hiện tại, Cổ đông hiện tại trong công ty niêm yết công khai. Peil: CSL Behring Innovation GmbH: Công việc hiện tại, Cổ đông hiện tại trong công ty niêm yết công khai. Knoll Machado: CSL Behring Innovation GmbH: Công việc hiện tại, Cổ đông hiện tại trong công ty niêm yết công khai. Claar: CSL Behring Innovation GmbH: Công việc hiện tại, Cổ đông hiện tại trong công ty niêm yết công khai. Raquet: CSL Behring Innovation GmbH: Công việc hiện tại, Cổ đông hiện tại trong công ty niêm yết công khai. Ponnuswamy: CSL Behring Innovation GmbH: Công việc hiện tại, Cổ đông hiện tại trong công ty niêm yết công khai. Mischnik: CSL Behring Innovation GmbH: Công việc hiện tại, Cổ đông hiện tại trong công ty niêm yết công khai. Herzog: CSL Behring GmbH: Công việc hiện tại, Cổ đông hiện tại trong công ty niêm yết công khai.
