Phát hiện nhạy cảm không xâm lấn đột biến KRAS và BRAF trong các tế bào khối u lưu thông của bệnh nhân ung thư đại trực tràng

Molecular Oncology - Tập 9 - Trang 850-860 - 2015
Nur-Afidah Mohamed Suhaimi1, Yu Miin Foong1, Daniel Yoke San Lee1, Wai Min Phyo1, Igor Cima1, Esther Xing Wei Lee1, Wei Lin Goh2, Wei-Yen Lim3, Kee Seng Chia3, Say Li Kong4, Min Gong4, Bing Lim4, Axel M. Hillmer4, Poh Koon Koh1,2, Jackie Y. Ying1, Min-Han Tan1,5
1Institute of Bioengineering and Nanotechnology, Singapore
2Fortis Surgical Hospital Singapore, Singapore
3Saw Swee Hock School of Public Health, National University of Singapore, Singapore
4Genome Institute of Singapore, Singapore
5National Cancer Centre, Singapore, Singapore

Tóm tắt

Các đặc điểm di truyền của sự biến đổi trong các mẫu sinh thiết khối u đóng vai trò là các chỉ số hữu ích trong tiên lượng và quản lý điều trị. Các tế bào khối u lưu thông (CTCs) thu được không xâm lấn từ máu ngoại vi có thể phục vụ như một đại diện của khối u. Sử dụng một chiến lược làm giàu CTC không nhãn mà chúng tôi đã thiết lập, chúng tôi nhắm đến việc phát triển các xét nghiệm nhạy cảm để đánh giá định tính kiểu gen khối u ở bệnh nhân. Máu được thu liên tiếp từ 44 bệnh nhân mắc ung thư đại trực tràng khu vực và giai đoạn muộn và 18 người hiến tặng khỏe mạnh đã được làm giàu cho CTC bằng công nghệ microsieve dựa trên kích thước. Để sàng lọc các đột biến CTC, chúng tôi đã thiết lập các xét nghiệm đặc hiệu cho codon 12/13 của KRAS và codon 600 của BRAF bằng phương pháp melt độ phân giải cao (HRM) và PCR đặc hiệu allel (ASPCR), và so sánh hiệu suất của chúng với pyrosequencing và giải trình tự Sanger. Đối với mỗi bệnh nhân, kiểu gen CTC thu được được so sánh với các mô khối u và mô bình thường tương ứng. Cả HRM và ASPCR có thể phát hiện các alen đột biến KRAS hoặc BRAF thấp tới 1.25%. HRM phát hiện 14/44 (31.8%) bệnh nhân có đột biến KRAS trong CTCs và 5/44 (11.3%) bệnh nhân có đột biến BRAF trong CTCs. ASPCR phát hiện các đột biến KRAS và BRAF trong CTCs của 10/44 (22.7%) và 1/44 (2.3%) bệnh nhân tương ứng. Có sự gia tăng phát hiện đột biến trong máu khi sử dụng hai phương pháp này. So sánh trạng thái đột biến của mô khối u và CTCs bằng HRM, chúng tôi quan sát thấy 84.1% sự đồng thuận trong kiểu gen KRAS (p = 0.000129, thử nghiệm chính xác Fisher; OR = 38.7, 95% CI = 4.05–369) và 90.9% (p = 0.174) sự đồng thuận trong kiểu gen BRAF. Kết quả của chúng tôi cho thấy việc làm giàu CTC, kết hợp với các phương pháp phát hiện đột biến nhạy cảm, có thể cho phép đánh giá kiểu gen khối u nhanh chóng, nhạy cảm và không xâm lấn.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

10.1158/1078-0432.CCR-04-0378 10.3816/CCC.2010.n.040 10.1097/PDM.0b013e31822b831a 10.1063/1.4780062 10.1016/S1470-2045(10)70130-3 10.1158/1078-0432.CCR-04-2670 10.1038/nrc1098 10.2353/jmoldx.2010.080131 10.1373/clinchem.2012.188557 10.1593/tlo.13367 10.1016/j.ccr.2007.12.003 10.1056/NEJMoa0804385 10.1038/nrc2627 10.1002/humu.22496 10.1016/j.jmoldx.2010.11.007 Langenbeck, 1841, On the development of cancer in the veins, and the transmission of cancer from man to the lower animals, Edinb. Med. Surg. J., 55, 251 10.1200/JCO.2008.21.6796 10.1093/jnci/djr070 10.1039/c2lc20750h 10.1038/nrclinonc.2010.171 10.1097/CAD.0b013e3283493160 10.1002/ijc.27987 1853 Longrnan Brown Green & Longman London J. Paget Lectures on Surgical Pathology 536 581 10.1158/1078-0432.CCR-12-1913 10.1371/journal.pone.0033788 10.1200/JCO.2010.34.5520 10.4161/cbt.28020 10.1200/JCO.2009.22.4295 10.2174/092986712801215973 10.1309/LWDY1AXHXUULNVHQ 10.1136/jcp.2011.090274 10.2353/jmoldx.2010.090188 10.1038/bjc.2011.19 10.1038/modpathol.2009.59
Thông tin
Thông tin xuất bản

Molecular Oncology

Tập 9

850-860

Thông tin tác giả