Tóm tắt: Chúng tôi đã phát triển một kỹ thuật mới để phân loại gen HLA lớp II bằng cách tiêu hóa các gen được khuếch đại bằng phản ứng chuỗi polymerase (PCR) với các endonuclease hạn chế (phương pháp PCR-RFLP). Phương pháp PCR-RFLP này là một kỹ thuật phân loại hiệu quả và thuận tiện cho các alen lớp II. Tuy nhiên, những đoạn nhỏ hoặc các băng gần nhau trên gel polyacrylamide đôi khi cản trở việc phân tích chính xác các băng RFLP. Hơn nữa, các enzyme hạn chế mà chúng tôi đã báo cáo trong các bài viết trước đây không đủ để xác định kiểu gen của tất cả các cá thể dị hợp. Ở đây, chúng tôi báo cáo một phương pháp PCR-RFLP cải tiến sử dụng một số enzyme hạn chế thông tin có một vị trí cắt đơn lẻ hoặc, ngược lại, không có vị trí cắt trong vùng DNA được khuếch đại, tùy thuộc vào các alen HLA, làm cho việc đọc các mẫu băng RFLP dễ dàng hơn rất nhiều. Mỗi exon thứ hai của gene HLA-DQA1 hoặc -DPB1 được khuếch đại chọn lọc từ DNA gen của 70 dòng tế bào B HLA đồng hợp và 100 người Nhật khỏe mạnh bằng PCR. DNA được khuếch đại được tiêu hóa bằng các endonuclease hạn chế và sau đó được điện di để kiểm tra việc cắt hay không cắt DNA. ApaLI, HphI, BsaJI, Fokl, MboII và Mnll có khả năng phân biệt tám alen của gene DQA1. Tương tự, 19 alen của gene DPB1 có thể được phân biệt với các enzyme Bsp1286I, Fokl, Ddel, BsaJI, BssHII, Cfr13I, Rsal, EcoNI và AvaII. Phương pháp PCR-RFLP đã được sửa đổi này có thể được áp dụng thành công cho các cá thể dị hợp. Do đó, phương pháp này đơn giản về kỹ thuật và thực tiễn hơn cho công việc phân loại HLA thường quy so với phương pháp PCR-RFLP trước đây của chúng tôi.
