Cách dẫn truyền lentivirus nhằm ức chế gen ổn định bằng RNAi trong các tế bào gốc

RNA - Tập 9 Số 4 - Trang 493-501 - 2003
Sheila A. Stewart1, Derek M. Dykxhoorn2, Deborah Palliser2, Hana Mizuno3, Evan Y. Yu4, Dong Sung An5, David M. Sabatini6, Irvin S. Y. Chen5, William C. Hahn4, Phillip A. Sharp2, Robert A. Weinberg6, Carl D. Novina2
1Whitehead Institute for Biomedical Research Cambridge, Massachusetts 02142, USA
2Massachusetts Institute of Technology,
3Whitehead Inst. for Biomedical Research
4Harvard University
5University of California at, Los Angeles
6Whitehead Institute for Biomedical Research

Tóm tắt

Các phương pháp gen toàn bộ đã chứng tỏ hữu ích trong việc khảo sát các con đường sinh học quan trọng ở những sinh vật mô hình như Saccharomyces cerevisiae, Drosophila melanogaster,Caenorhabditis elegans, nhưng các kỹ thuật tương tự đã gặp khó khăn khi áp dụng vào hệ thống động vật có vú. Mặc dù việc điều chỉnh bộ gen ở chuột đã dẫn đến việc xác định các gen và chức năng của chúng, phương pháp này tốn kém, mất nhiều thời gian và thường dẫn đến các kiểu hình chết người. Can thiệp RNA (RNAi) là một quá trình bảo tồn tiến hóa của việc tắt gen đã trở thành một công cụ mạnh mẽ để điều tra chức năng gen thông qua di truyền học đảo ngược. Ở đây, chúng tôi mô tả việc vận chuyển các cassette biểu hiện RNA hình chóp nhắm tới protein huỳnh quang xanh (GFP) bằng cách sử dụng các vector retrovirus dựa trên virus bạch cầu Moloney và lentivirus. Cả hai dòng tế bào biến đổi và tế bào dendritic nguyên phát, thường bị kháng với việc chuyển gen dựa trên chuyển nạp, đã thể hiện sự ức chế ổn định các gen mục tiêu, bao gồm gen ức chế khối u TP53 trong các tế bào sợi người bình thường. Báo cáo này chứng minh rằng cả việc biểu hiện RNAi trung gian bởi virus bạch cầu Moloney và vector lentivirus có thể đạt được sự ức chế gen hiệu quả, ổn định trong nhiều hệ thống sinh học khác nhau và sẽ hỗ trợ trong việc làm sáng tỏ chức năng gen trong nhiều loại tế bào bao gồm cả tế bào gốc.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

1999, J. Virol., 73, 7671, 10.1128/JVI.73.9.7671-7677.1999

10.1073/pnas.242594499

10.1126/science.1068999

———. 2002b. Stable suppression of tumorigenicity by virus-mediated RNA interference. Cancer Cell. Published online.

10.1073/pnas.90.17.8033

10.1186/1472-6750-2-15

1998, J. Virol., 72, 8463, 10.1128/JVI.72.11.8463-8471.1998

10.1038/35078107

10.1089/104303402753812494

1999, J. Leukoc. Biol., 66, 263, 10.1002/jlb.66.2.263

10.1006/jmbi.1998.2518

10.1016/S0959-437X(02)00290-3

10.1084/jem.176.6.1693

10.1016/S1074-7613(02)00365-5

10.1084/jem.191.10.1699

10.1016/S0952-7915(02)00354-0

10.1126/science.286.5448.2244

10.1038/418038a

10.1038/nrg908

10.1017/S1355838202024032

10.1093/nar/18.12.3587

10.1038/ng1202-681a

10.1016/S0014-5793(97)00313-X

10.1016/S1535-6108(02)00092-2

10.1101/gad.981002

10.1038/nbt0502-505

10.1084/jem.186.8.1247

10.1146/annurev.biochem.67.1.227

10.1073/pnas.231606698

10.1172/JCI200215962

10.1073/pnas.082117599

10.1038/35081168

10.1038/nbt739

10.1073/pnas.91.10.4407

10.1073/pnas.092143499