Tách biệt và đặc trưng hóa các đột biến hiệu quả trong chuyển gen plasmid ở Mycobacterium smegmatis

Sự phát triển gần đây của các vector và phương pháp để đưa DNA tái tổ hợp vào các thành viên của chi Mycobacterium đã cung cấp những cách tiếp cận mới để nghiên cứu những vi khuẩn quan trọng này. Trong khi hầu hết các chủng mycobacteria gây bệnh phát triển chậm, Mycobacterium smegmatis là một loài phát triển nhanh và không gây bệnh, đã được sử dụng trong nhiều năm như một vật chủ cho sự phát triển của mycobacteriophage và, gần đây, như một vật chủ cho việc giới thiệu DNA tái tổ hợp. Việc sử dụng nó như một vật chủ sao chép để phân tích các gen mycobacteria đã bị hạn chế bởi khả năng chuyển đổi plasmid không hiệu quả. Công trình này mô tả việc tách biệt và đặc trưng hóa các đột biến của M. smegmatis có thể được chuyển đổi, sử dụng phương pháp điện chuyển, với hiệu suất cao gấp 10⁴ đến 10⁵ lần so với chủng gốc, tạo ra hơn 10⁵ biến thể mỗi μg DNA plasmid. Các đột biến mang lại tính trạng chuyển đổi plasmid hiệu quả (Ept) này không làm ảnh hưởng đến sự tiêm chuyển phage hoặc sự tích hợp DNA vào nhiễm sắc thể M. smegmatis, nhưng dường như chỉ đặc hiệu cho chuyển đổi plasmid. Những đột biến Ept như vậy đã được sử dụng để xác định các nucleotide DNA plasmid cần thiết cho sự sao chép của plasmid Mycobacterium fortuitum pAL5000 trong mycobacteria bằng cách cho phép chuyển đổi một thư viện các cấu trúc hybrid plasmid. Việc chuyển đổi plasmid hiệu quả ở M. smegmatis sẽ tạo điều kiện cho việc phân tích chức năng, biểu hiện và sự sao chép của gen mycobacterial, từ đó hỗ trợ phát triển BCG như một vector vắc xin tái tổ hợp đa trị và trong phân tích di truyền các yếu tố gây virulence của mycobacteria gây bệnh.