Tách biệt và đặc trưng hóa các đột biến hiệu quả trong chuyển gen plasmid ở Mycobacterium smegmatis

Molecular Microbiology - Tập 4 Số 11 - Trang 1911-1919 - 1990
Scott B. Snapper1,2, Rachel E. Melton3, Shuhaimi Mustafa4, Tobias Kieser5, William R. Jacobs2
1Department of Medicine, Bngham and Women's Hospital. Harvard Medical School, Boston, Massachusetts 02115, USA.
2Department of Microbiology and Immunology
3Howard Hughes Medical Institute. Albert Einstein College of Medicine, 1300 Morris Park Avenue. Bronx. New York 10461. USA.
4Whitehead Institute for Biomedical Research Nine Cambridge Center Cambridge, Massachusetts 02142 USA
5John Innes institute and AFRC, Institute of Plant Science Research, Colney Lane, Norwich NR4 7UH.

Tóm tắt

Tóm tắtSự phát triển gần đây của các vector và phương pháp để đưa DNA tái tổ hợp vào các thành viên của chi Mycobacterium đã cung cấp những cách tiếp cận mới để nghiên cứu những vi khuẩn quan trọng này. Trong khi hầu hết các chủng mycobacteria gây bệnh phát triển chậm, Mycobacterium smegmatis là một loài phát triển nhanh và không gây bệnh, đã được sử dụng trong nhiều năm như một vật chủ cho sự phát triển của mycobacteriophage và, gần đây, như một vật chủ cho việc giới thiệu DNA tái tổ hợp. Việc sử dụng nó như một vật chủ sao chép để phân tích các gen mycobacteria đã bị hạn chế bởi khả năng chuyển đổi plasmid không hiệu quả. Công trình này mô tả việc tách biệt và đặc trưng hóa các đột biến của M. smegmatis có thể được chuyển đổi, sử dụng phương pháp điện chuyển, với hiệu suất cao gấp 104 đến 105 lần so với chủng gốc, tạo ra hơn 105 biến thể mỗi μg DNA plasmid. Các đột biến mang lại tính trạng chuyển đổi plasmid hiệu quả (Ept) này không làm ảnh hưởng đến sự tiêm chuyển phage hoặc sự tích hợp DNA vào nhiễm sắc thể M. smegmatis, nhưng dường như chỉ đặc hiệu cho chuyển đổi plasmid. Những đột biến Ept như vậy đã được sử dụng để xác định các nucleotide DNA plasmid cần thiết cho sự sao chép của plasmid Mycobacterium fortuitum pAL5000 trong mycobacteria bằng cách cho phép chuyển đổi một thư viện các cấu trúc hybrid plasmid. Việc chuyển đổi plasmid hiệu quả ở M. smegmatis sẽ tạo điều kiện cho việc phân tích chức năng, biểu hiện và sự sao chép của gen mycobacterial, từ đó hỗ trợ phát triển BCG như một vector vắc xin tái tổ hợp đa trị và trong phân tích di truyền các yếu tố gây virulence của mycobacteria gây bệnh.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

10.1016/S0079-6603(08)60204-4

10.1016/0076-6879(83)00059-2

Bloom B.R., 1986, Learning from leprosy: a perspective on immunology and the third world, J Immunol, 137, i, 10.4049/jimmunol.137.1.i.i

Chi N.W., 1978, Functional expression of two Bacillus subtilis chromosomal genes in Escherichia coli, J Bacteriol, 133, 816, 10.1128/jb.133.2.816-821.1978

10.1128/JB.161.3.1093-1102.1985

10.2105/AJPH.44.10.1326

Grosskinsky C.M., 1989, Genetic relationships among Mycobacterium leprae, Mycobacterium tuberculosis, and candidate leprosy vaccine strains determined by DNA hybridization: identification of an M. leprae‐specific repetitive sequence, Infect Immun, 57, 1535, 10.1128/iai.57.5.1535-1541.1989

10.1073/pnas.84.6.1679

10.1128/JB.172.2.519-524.1990

10.1073/pnas.83.6.1926

10.1038/327532a0

10.1093/clinids/11.Supplement_2.S404

10.1016/0378-1119(88)90419-2

Kieser T., 1986, Cloning and expression of Mycobacterioum bovis BCG DNA in Streptomyces lividans, J. Bacteriol, 168, 72, 10.1128/jb.168.1.72-80.1986

10.1007/BF01567167

10.1016/S0769-2609(85)80045-4

10.1016/0041-3879(89)90046-9

10.1111/j.1475-4754.1982.tb01001.x

10.1016/0378-1119(88)90048-0

10.1128/jb.169.3.1080-1088.1987

10.1073/pnas.85.18.6987

10.1128/IAI.50.3.800-806.1985

10.1073/pnas.82.9.2583

10.1038/316450a0

10.1111/j.1365-2958.1989.tb00100.x

Thông tin
Thông tin xuất bản

Molecular Microbiology

Tập 4 Số 11

1911-1919

Thông tin tác giả