Phát hiện hydro peroxide nội bào và anion superoxide trong tế bào nội mô

Một trong những mục tiêu của việc nghiên cứu tế bào nội mô in vitro là đánh giá các tương tác giữa bạch cầu trung tính và tế bào nội mô, bao gồm những hậu quả tiềm tàng của tổn thương do chất oxy hóa gây ra cho tế bào nội mô. Hiện tại, hiểu biết về chức năng oxy hóa của tế bào nội mô chủ yếu được rút ra từ việc đo lường các sản phẩm ngoại bào. Chúng tôi đã sử dụng 2 phẩm nhuộm, 2′,7′-dichlorofluorescin diacetate (DGFH-DA) và hydroethidine (HE), để đo hydro peroxide (H2O2) và anion superoxide (O2-) tương ứng, nhằm đánh giá khả năng theo dõi các cơ chế oxy hóa trong tế bào nội mô và cung cấp một phương pháp đáng tin cậy để đo lường các chất oxy hóa nội bào. Các tế bào nội mô được nhuộm với DCFH-DA và kích thích bằng H2O2 cho thấy sự gia tăng sản phẩm huỳnh quang 2′,7′-dichlorofluorescein (DCF) (đo lường H2O2 nội bào) đạt đỉnh ở 10 phút. Các tế bào nội mô được nhuộm với HE và kích thích bằng H2O2 cho thấy sự gia tăng sản phẩm huỳnh quang ethidium bromide (EB) (đo lường O2- nội bào) kéo dài khoảng 60 phút. Superoxide dismutase làm tăng huỳnh quang DCF ở các tế bào nội mô được kích thích bằng H2O2 lên 158%. Allopurinol (chất ức chế xanthine oxidase) làm giảm huỳnh quang DCF và EB lần lượt 48% và 37% trong các tế bào nội mô được kích thích bằng H2O2. Catalase hoàn toàn ức chế sự gia tăng huỳnh quang DCF hoặc EB ở các tế bào nội mô được kích thích bằng H2O2. Có một mối tương quan trực tiếp giữa cường độ huỳnh quang DCF và EB trung bình và nồng độ H2O2 hoặc số lượng bạch cầu trung tính được kích thích với phorbol 12-myristate 13-acetate thêm vào tế bào nội mô. Chúng tôi kết luận từ các nghiên cứu này rằng DCFH-DA và HE có thể được sử dụng để đo H2O2 và O2- nội bào trong tế bào nội mô và rằng con đường xanthine oxidase cho việc sản xuất O2- nội bào chiếm khoảng 40% tổng số O2- nội bào được tạo ra trong tế bào nội mô sau khi được kích thích với H2O2. Sự kết hợp giữa cytometry hình ảnh và cytometry dòng chảy sẽ rất quan trọng cho các đánh giá trong tương lai về chức năng của tế bào nội mô.