Sự hấp thụ RNA hai chuỗi của giống giun tròn tiền ký sinh dẫn đến RNA can thiệp
Tóm tắt
Can thiệp RNA có giá trị trong việc xác định chức năng gen ở nhiều sinh vật. Giun tròn ký sinh thực vật không thể tiếp nhận RNA thông qua tiêm vi, và không có sự hấp thụ qua đường miệng cho đến khi chúng ở trong cây. Chúng tôi đã sử dụng octopamine để kích thích sự hấp thụ từ những con giun tròn tiền ký sinh giai đoạn hai của hai loại giun tròn kén, Heterodera glycines và Globodera pallida. Kỹ thuật mới này đã được sử dụng để tạo điều kiện cho sự hấp thụ RNA hai sợi (dsRNA) cùng với isothiocyanate fluorescein như một dấu hiệu trực quan. Việc nhắm mục tiêu vào các proteinase cysteine không làm giảm số lượng ký sinh trùng, nhưng đã gây ra sự thay đổi từ tỷ lệ giới tính nữ/nam bình thường là 3:1 sang 1:1 sau 14 ngày bị nhiễm (dpi). Việc tiếp xúc H. glycines với dsRNA tương ứng với một protein mới được đặc trưng có tính đồng đoạn với lectin loại C không ảnh hưởng đến số phận giới tính, nhưng đã thu hồi ít hơn 41% ký sinh trùng từ cây trồng. Như mong đợi, việc điều trị bằng dsRNA tương ứng với protein tinh trùng chính (MSP) không có ảnh hưởng đến sự phát triển của ký sinh trùng hay số phận giới tính trong 14 ngày. Phân tích Northern cho thấy có sự giảm sự dồi dào của bản sao cho hai mRNA nhắm mục tiêu xuất hiện trong J2, cùng với một sự ức chế muộn hơn đối với bản sao MSP khi con đực phát triển tinh trùng ở 15 dpi. Những phát hiện này thiết lập một quy trình cho RNAi của giun tròn ký sinh thực vật.
Từ khóa
Tài liệu tham khảo
Atkinson H. J., 1996, J. Nematol., 28, 209
Atkinson, H. J., Winter, M. D., and McPherson, M. J. September 2000. Control of crop pests and animal parasites through direct neuronal uptake. U.S. patent 46070GB
Kamath, R. S., Martinez-Campos, M., Zipperlen, P., Raser, A. G., and Ahringer, J. 2000. Effectiveness of specific RNA-mediated interference through ingested double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Genome Biol. 2:research0002.1
Novitski C. E., 1993, J. Nematol., 25, 548
Sambrook, J., Fritsch, E. F., and Maniatis, T. 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY, U.S.A.
Sasser, J. N., and Freckman, D. W. 1987. A world perspective on nematology: The role of the society. Pages 7-14 in: Vistas on Nematology. J. A. Veech and D. W. Dickerson, eds. Society of Nematologists. Hyattsville, MD, U.S.A.
Urwin P. E., 1997, Parasitology, 114, 605
Willats W. G. T., 1995, J. Nematol., 27, 135
Wyss U., 1992, Fundam. Appl. Nematol., 15, 75