Kỹ Thuật Cải Tiến Để Quan Sát Cấu Trúc Màng Nấm Qua Kính Hiển Vi Điện Tử

Các tế bào nấm men đại diện cho một hệ thống mô hình mạnh mẽ trong sinh học tế bào chủ yếu nhờ khả năng dễ dàng thực hiện các thao tác di truyền. Ngày càng có nhiều nghiên cứu tập trung vào các gen đột biến dẫn đến sự thay đổi về cấu trúc và bào quan của tế bào. Để xác định các thay đổi kiểu hình liên quan, thường thì cần sử dụng sức mạnh phân giải của kính hiển vi điện tử. So với các tế bào eukaryote cao hơn, các tế bào nấm men đặc biệt khó bảo quản chủ yếu do sự hiện diện của một lớp vách tế bào dày, hình thành rào cản đối với sự khuếch tán của các chất cố định. Mặc dù đã có một số quy trình nhằm khắc phục những khó khăn này, nhưng không có quy trình nào được thiết lập như là quy trình chuẩn. Do đó, kính hiển vi điện tử vẫn chưa được sử dụng thường xuyên như một công cụ trong sinh học tế bào nấm men. Điều này đã thúc đẩy chúng tôi phát triển một giao thức dễ dàng theo dõi cho kính hiển vi điện tử truyền qua nấm men, có thể hữu ích trong tất cả các trường hợp mà tính toàn vẹn màng và hình thái bào quan được nhấn mạnh. Một phương pháp để làm cho dịch cytoplasm nấm men dễ tiếp cận hơn với các dung dịch cố định và nhuộm là bằng cách tiêu hóa enzym của vách tế bào. Theo cách tiếp cận này, chúng tôi đã có thể bảo quản các tế bào nấm men và các bào quan của chúng một cách đáng tin cậy. Điều trị bằng enzym zymolyase 20T để loại bỏ một phần vách tế bào nấm men cho phép cố định, bảo quản và hình dung dịch cytoplasm nấm men, tiết lộ cấu trúc siêu vi. Sự tiến bộ của kỹ thuật này được thể hiện với ty thể như một mô hình bào quan. Các nghiên cứu của chúng tôi trên nhiều dòng nấm men đột biến cho thấy rõ sức mạnh của kỹ thuật tiêu hóa enzym trong việc hình dung những thay đổi tinh tế của cấu trúc màng và hình thái bào quan.