CÔNG NGHỆ CHUẨN BỊ CÁC TẾ BÀO PARENCHYMAL GAN RỪNG CÓ HIỆU SUẤT CAO

Một kỹ thuật mới sử dụng việc tuần hoàn liên tục dòng dịch perfusion của gan chuột trong tình trạng tại chỗ, lắc gan trong môi trường đệm in vitro, và lọc mô qua lưới nylon, đạt được việc chuyển đổi khoảng 50% gan thành các tế bào parenchymal nguyên vẹn, tách biệt. Các môi trường perfusion bao gồm: (a) dung dịch Hanks không chứa canxi có 0,05% collagenase và 0,10% hyaluronidase, và (b) dung dịch Hanks không chứa magiê và canxi có 2 mM ethylenediaminetetraacetate. Các nghiên cứu sinh hóa và hình thái học chỉ ra rằng các tế bào tách biệt này có khả năng sống sót. Chúng hô hấp trong môi trường có chứa ion canxi, tổng hợp glucose từ lactate, không thấm với inulin, không nhuộm bằng trypan blue, và giữ nguyên tính toàn vẹn cấu trúc của chúng. Kính hiển vi điện tử của các sinh thiết được lấy trong và sau khi perfusion cho thấy rằng các desmosome bị cắt đứt nhanh chóng. Các vùng chứa hemidesmosome của màng tế bào bị lún vào và có vẻ như bị chèn ra và di chuyển về phía trung tâm. Tuy nhiên, các kết nối chặt và ngắt vẫn tồn tại trên các tế bào nguyên vẹn, tách biệt, giữ lại các đoạn nhỏ của tế bào chất từ các tế bào parenchymal trước đó. Các tế bào không giữ kết nối chặt và ngắt thể hiện sự sưng phồng của các bào vacuole Golgi và các bào vacuole trong tế bào chất ngoại vi. Sự hình thành vacuole tế bào chất trong một tỷ lệ nhỏ các tế bào và sự mất potassium là những dấu hiệu duy nhất của tổn thương tế bào được phát hiện. Theo các tham số khác được đo, các tế bào tách biệt tương đương với các tế bào parenchymal gan bình thường tại chỗ về hình dáng và chức năng.