Phản ứng phiên mã toàn bộ gen của Trichoderma reesei đối với lignocellulose bằng cách sử dụng giải trình tự RNA và so sánh với Aspergillus niger

Laure Nicolas Annick Ries1, Steven T. Pullan1, Stéphane Delmas1, Sunir Malla2, Martin Blythe2, David B. Archer1
1School of Biology, University of Nottingham, Nottingham, NG7 2RD, UK
2Deep Seq, Centre for Genetics and Genomics, Queen’s Medical Centre, University of Nottingham, Nottingham, NG7 2UH, UK

Tóm tắt

Tóm tắtĐặt vấn đề

Phần lớn quy trình sản xuất nhiên liệu sinh học thế hệ thứ hai là quá trình phân giải enzym lignocellulose từ sinh khối thành đường có thể lên men. Nhiều loại nấm sản xuất enzym có khả năng phân giải lignocellulose và các hỗn hợp enzym từ một số loài nấm, bao gồm những loài được nghiên cứu kỹ lưỡng như Trichoderma reeseiAspergillus niger, hiện đang có sẵn trên thị trường cho quy trình này. Các hỗn hợp enzym có sẵn trên thị trường không nhất thiết đại diện cho sự đa dạng enzym mà các loại nấm tự sản xuất khi đối diện với một chất liệu lignocellulose phức tạp. Nghiên cứu đã được thực hiện để khám phá sự cảm ứng toàn cầu của các gen trong phản ứng với sự tiếp xúc của T. reesei với rơm lúa mì thông qua RNA-seq và so sánh với dữ liệu RNA-seq đã công bố cũng như mô hình cách mà A. niger cảm nhận và phản ứng với rơm lúa mì.

Kết quả

Trong T. reesei, mức độ của các phiên mã mã hóa cho các enzym phân giải thành tế bào đã biết và dự đoán rất cao sau 24 giờ tiếp xúc với rơm (khoảng 13% tổng số mRNA) nhưng thấp hơn so với A. niger (khoảng 19% tổng số mRNA). Phân tích kỹ lưỡng cho thấy rằng các enzym thuộc cùng họ hydrolase glycoside nhưng từ các họ esterase và lyase polysaccharide khác nhau đều được tăng cường trong cả hai sinh vật. Các protein phụ có thể có vai trò trong việc tăng cường phân giải carbohydrate trong A. niger cũng đã được phát hiện trong T. reesei và các loại enzym được cảm ứng nhìn chung tương tự với các enzym trong A. niger. Tương tự như A. niger, các phiên mã đối kháng có mặt trong T. reesei và sự biểu hiện của chúng được điều chỉnh bởi điều kiện sinh trưởng.

Kết luận

T. reesei sử dụng một loạt các enzym tương tự như A. niger để phân giải một chất nền lignocellulose rắn. Điều này cho thấy một chiến lược bảo tồn đối với việc phân hủy lignocellulose ở cả hai loại nấm ăn mùn. Nghiên cứu này cung cấp cơ sở cho việc phân tích và đặc trưng hóa các gen được chứng minh là có sự cảm ứng cao trong sự hiện diện của một chất nền lignocellulose. Dữ liệu sẽ giúp làm sáng tỏ cơ chế nhận diện chất nền rắn và sự phân hủy tiếp theo của T. reesei và cung cấp thông tin có thể hữu ích cho việc sản xuất hiệu quả nhiên liệu sinh học thế hệ thứ hai.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

Banerjee G, Scott-Craig JS, Walton JD: Improving enzymes for biomass conversion: a basic research perspective. Bioen Res. 2010, 3: 82-92. 10.1007/s12155-009-9067-5.

Fukuda H, Kondo A, Tamalampudi S: Bioenergy: Sustainable fuels from biomass by yeast and fungal whole-cell biocatalysts. Biochem Eng J. 2009, 44: 2-12. 10.1016/j.bej.2008.11.016.

Delmas S, Pullan S, Gaddipati S, Kokolski M, Malla S, Blythe MJ, Ibbett R, Campbell M, Liddell S, Aboobaker A, Tucker GA, Archer DB: Uncovering the genome-wide transcriptional responses of the filamentous fungus Aspergillus niger to lignocellulose using RNA sequencing. PLoS Genet. 2012, 8: e1002875-10.1371/journal.pgen.1002875.

Zhu JY, Pan X, Zalesny RS: Pre-treatment of woody biomass for biofuel production: energy efficiency, technologies and recalcitrance. Appl Microbiol Biotechnol. 2010, 87: 847-857. 10.1007/s00253-010-2654-8.

Dodd D, Cann IKO: Enzymatic deconstruction of xylan for biofuel production. GCB Bioen. 2009, 1: 2-17. 10.1111/j.1757-1707.2009.01004.x.

Dashtban M, Schraft H, Qin W: Fungal bioconversion of lignocellulosic residues; opportunities and perspectives. Int J Biol Sci. 2009, 5: 578-595.

Alvira P, Tomas-Pejo E, Ballesteros M, Negro MJ: Pretreatment technologies for an efficient bioethanol production process based on enzymatic hydrolysis: a review. Bioresource Technol. 2010, 101: 4851-4861. 10.1016/j.biortech.2009.11.093.

Elkins JG, Raman B, Keller M: Engineered microbial systems for enhanced conversion of lignocellulosic biomass. Curr Opin Biotech. 2010, 21: 657-662. 10.1016/j.copbio.2010.05.008.

Schuster A, Schmoll M: Biology and biotechnology of Trichoderma. Appl Microbiol Biot. 2010, 87: 787-799. 10.1007/s00253-010-2632-1.

Ike M, Park J-Y, Tabuse M, Tokuyasu K: Cellulase production on glucose-based media by the UV-irradiated mutants of Trichoderma reesei. Appl Microbiol Biot. 2010, 87: 2059-2066. 10.1007/s00253-010-2683-3.

Kubicek CP, Mikus M, Schuster A, Schmoll M, Seiboth B: Metabolic engineering strategies for the improvement of cellulase production by Hypocrea jecorina. Biotechnol Biofuels. 2009, 2: 6834-6848.

Portnoy T, Margeot A, Seidl-Seiboth V, Le Crom S, Chaabane FB, Linke R, Seiboth B, Kubicek CP: Differential regulation of the cellulase transcription factors XYR1, ACE2 and ACE1 in Trichoderma reesei strains producing high and low levels of cellulase. Eukaryot Cell. 2011, 10: 262-271. 10.1128/EC.00208-10.

Ayrinhac C, Margeot A, Ferreira NL, Chaabane FB, Monot F, Ravot G, Sonet J-M, Fourage L: Improved saccharification of wheat straw for biofuel production using an engineered secretome of Trichoderma reesei. Org Process Res Dev. 2011, 15: 275-278. 10.1021/op100218a.

Jeoh T, Michener W, Himmel ME, Decker SR, Adney WS: Implications of cellobiohydrolase glycosylation for use in biomass conversion. Biotechnol Biofuels. 2008, 1: 1186-1198.

Liu T, Wang T, Li X, Liu X: Improved heterologous gene expression in Trichoderma reesei by cellobiohydrolase I gene (cbh1) promoter optimisation. ABBS. 2008, 40: 158-165.

Mathew GM, Sukumaran RK, Singhania RR, Pandey A: Progress in research on fungal cellulases for lignocelluloses degradation. J Sci Ind Res India. 2008, 67: 898-907.

Rahman Z, Shida Y, Furukawa T, Suzuki Y, Okada H, Ogasawara W, Morikawa Y: Application of Trichoderma reesei cellulase and xylanase promoters through homologous recombination for enhanced production of extracellular β-glucosidase I. Biosci Biotech Bioch. 2009, 73: 1083-1089. 10.1271/bbb.80852.

Häkkinen M, Arvas M, Oja M, Aro N, Penttilä M, Saloheimo M, Pakula TM: Re-annotation of the CAZy genes of Trichoderma reesei and transcription in the presence of lignocellulosic substrates. Microb Cell Fact. 2012, 11: 134-160. 10.1186/1475-2859-11-134.

Klein-Marcuschamer D, Oleskowicz-Popiel P, Simmons BA, Blanch HW: The challenge of enzyme cost in the production of lignocellulosic biofuels. Biotechnol Bioeng. 2012, 109: 1083-1087. 10.1002/bit.24370.

Martinez D, Berka RM, Henrissat B, Saloheimo M, Arvas M, Baker SE, Chapman J, Chertkov O, Coutinho PM, Cullen D, Danchin EGJ, Grigoriev IV, Harris P, Jackson M, Kubicek C, Han CS, Ho I, Larrondo LF, Lopez de Leon A, Magnuson JK, Merino S, Misra M, Nelson B, Putnam N, Robbertse B, Salamov AA, Schmoll M, Terry A, Thayer N, Westerholm-Parvinen A: Genome sequencing and analysis of the biomass-degrading fungus Trichoderma reesei (syn. Hypocrea jecorina). Nat Biotechnol. 2008, 26: 553-560. 10.1038/nbt1403.

Bloom JS, Khan Z, Kruglyak L, Singh M, Caudy AA: Measuring differential gene expression by short read sequencing: quantitative comparison to 2-channel expression microarrays. BMC Genomics. 2009, 10: 221-230. 10.1186/1471-2164-10-221.

Mortazavi A, Williams BA, McCue K, Schaeffer L, Wold B: Mapping and quantifying mammalian transcriptomes by RNA-seq. Nat Methods. 2008, 5: 621-628. 10.1038/nmeth.1226.

Wang L, Feng Z, Wang X, Wang X, Zhang X: DEGseq: an R package for identifying differentially expressed genes from RNA-seq data. Bioinformatics. 2010, 26: 136-138. 10.1093/bioinformatics/btp612.

Cantarel BL, Coutinho PM, Rancurel C, Bernard T, Lombard V, Henrissat B: The Carbohydrate-Active EnZymes database (CAZy): an expert resource for Glycogenomics. Nucleic Acids Res. 2009, 37: D233-D238. 10.1093/nar/gkn663.

Pel HJ, De Winde JH, Archer DB, Dyer PS, Hofmann G, Schaap PJ, Turner G, De Vries RP, Albang R, Albermann K, Andersen MR, Bendtsen JD, Benen JAE, Van den Berg M, Breestraat S, Caddick MX, Contreras R, Cornell M, Coutinho PM, Danchin EGJ, Debets AJM, Dekker P, Van Dijck PWM, Van Dijk A, Dijkhuizen L, Driessen AJM, D’Enfert C, Geysens S, Goosen C, Groot GSP: Genome sequencing and analysis of the versatile cell factory Aspergillus niger CBS 513.88. Nat Biotechnol. 2007, 25: 221-231. 10.1038/nbt1282.

van den Brink J, de Vries RP: Fungal enzyme sets for plant polysaccharide degradation. Appl Microbiol Biotechnol. 2011, 91: 1477-1492. 10.1007/s00253-011-3473-2.

Quinlan RJ, Sweeney MD, Leggio LL, Otten H, Poulsen J-CN, Johansen KS, Krogh KBRM, Jørgensen CI, Tovborg M, Anthonsen A, Tryfona T, Walter CP, Dupree P, Xu F, Davies GJ, Walton PH: Insights into the oxidative degradation of cellulose by a copper metalloenzyme that exploits biomass components. P Natl Acad Sci USA. 2011, 108: 15079-15084. 10.1073/pnas.1105776108.

Harris PV, Welner D, McFarland KC, Re E, Poulson J-CN, Brown K, Salbo R, Ding H, Vlasenko E, Merino S, Xu F, Cherry J, Larsen S, Leggio LL: Stimulation of lignocellulosic biomass hydrolysis by proteins of glycoside hydrolase family 61: structure and function of a large, enigmatic family. Biochemistry. 2010, 49: 3305-3316. 10.1021/bi100009p.

Li X-L, Špániková S, de Vries RP, Biely P: Identification of genes encoding microbial glucuronoyl esterases. FEBS Lett. 2007, 581: 4029-4035. 10.1016/j.febslet.2007.07.041.

Kester HC, Benen JAE, Visser J, Warren ME, Orlando R, Bergmann C, Magaud D, Anker D, Doutheau A: Tandem mass spectrometric analysis of Aspergillus niger pectin methylesterase: mode of action on fully methyl-esterified oligogalacturonates. Biochem J. 2000, 346: 469-474. 10.1042/0264-6021:3460469.

Mølgaard A, Kauppinen S, Larsen S: Rhamnogalacturonan acetylesterase elucidates the structure and function of a new family of hydrolases. Structure. 2000, 8: 373-383. 10.1016/S0969-2126(00)00118-0.

De Vries RP, Parenicova L, Hinz SWA, Kester HCM, Beldman G, Benen JAE, Visser J: The beta-1,4-endogalactanase A gene from Aspergillus niger is specifically induced on arabinose and galacturonic acid and plays an important role in the degradation of pectic hairy regions. Eur J Biochem. 2002, 269: 4985-4993. 10.1046/j.1432-1033.2002.03199.x.

Fujii T, Murakami K, Sawayama S: Cellulase hyperproducing mutants derived from the fungus Trichoderma reesei QM9414 produced large amounts of cellulases at the enzymatic and transcriptional levels. Biosci Biotechnol Biochem. 2010, 74: 419-422. 10.1271/bbb.90655.

Ganzlin M, Rinas U: In-depth analysis of the Aspergillus niger glucoamylase (glaA) promoter performance using high-throughput screening and controlled bioreactor cultivation techniques. J Biotechnol. 2008, 135: 266-271. 10.1016/j.jbiotec.2008.04.005.

Zhou Q, Zu J, Kou Y, Lv X, Zhang X, Zhao G, Zhang W, Chen G, Liu W: Differential involvement of β-glucosidases from Hypocrea jecorina in rapid induction of cellulase genes by cellulose and cellobiose. Eukaryot Cell. 2012, 11: 1371-1381. 10.1128/EC.00170-12.

Wang Z, Gerstein M, Snyder M: RNA-Seq: a revolutionary tool for transcriptomics. Nat Rev Genet. 2009, 10: 57-63. 10.1038/nrg2484.

Zhang J, Siika-aho M, Tenkanen M, Viikari L: The role of acetyl xylan esterase in the solubilisation of xylan and enzymatic hydrolysis of wheat straw and giant reed. Biotechnol Biofuels. 2012, 4: 60-69.

Saloheimo M, Paloheimo M, Hakola S, Pere J, Swanson B, Nyyssönen E, Bhatia A, Ward M, Penttilä M: Swollenin, a Trichoderma reesei protein with sequence similarity to the plant expansions, exhibits disruption activity on cellulosic materials. Eur J Biochem. 2002, 269: 4202-4211. 10.1046/j.1432-1033.2002.03095.x.

Foreman PK, Brown D, Dankmeyer L, Dean R, Diener S, Dunn-Coleman NS, Goedegebuur F, Houfek TD, England GJ, Kelley AS, Meerman HJ, Mitchell T, Mitchinson C, Olivares HA, Teunissen PJM, Yao J, Ward M: Transcriptional regulation of biomass-degrading enzymes in the filamentous fungus Trichoderma reesei. J Biol Chem. 2003, 278: 31988-31997. 10.1074/jbc.M304750200.

Mao C, Obeid LM: Ceramidases: regulators of cellular responses mediated by ceramide, sphingosine and sphingosine-1-phosphate. Biochim Biophys Acta. 2008, 1781: 424-434. 10.1016/j.bbalip.2008.06.002.

Schmoll M, Zeilinger S, Mach RL, Kubicek CP: Cloning of genes expressed early during cellulase induction in Hypocrea jecorina by a rapid substraction hybridisation approach. Fungal Genet Biol. 2004, 41: 877-887. 10.1016/j.fgb.2004.06.002.

Linder MB, Szilvay GR, Nakari-Setälä T, Penttilä M: Hydrophobins: the protein-amphiphiles of filamentous fungi. FEMS Microbiol Rev. 2005, 29: 877-896. 10.1016/j.femsre.2005.01.004.

Ohtaki S, Maeda H, Takahashi T, Yamagata Y, Hasegawa F, Gomi K, Nakajima T, Abe K: Novel hydrophobic surface binding protein, HsbA, produced by Aspergillus oryzae. Appl Environ Microb. 2006, 72: 2407-2413. 10.1128/AEM.72.4.2407-2413.2006.

Rey M, Ohno S, Pintor-Toro JA, Llobell A, Benitez T: Unexpected homology between inducible cell wall protein QID74 of filamentous fungi and BR3 salivary protein of the insect Chironomus. Proc Natl Acad Sci U S A. 1998, 95: 6212-6216. 10.1073/pnas.95.11.6212.

Dean RA, Talbot NJ, Ebbole DJ, Farman ML, Mitchell TK, Orbach MJ, Thon M, Kulkarni R, Xu J-R, Pan H, Read ND, Yong-Hwan L, Carbone I, Brown D, Oh YY, Donofrio N, Jeong JS, Soanes DM, Djonovic S, Kolomiets E, Rehmeyer C, Li W, Harding M, Kim S, Lebrun M-H, Bohnert H, Coughlan S, Butler J, Calvo S, Ma L-J: The genome sequence of the rice blast fungus Magnaporthe oryzae. Nature. 2005, 434: 980-986. 10.1038/nature03449.

Wilson RA, Talbot NJ: Under pressure: investigating the biology of plant infection by Magnaporthe oryzae. Nat Rev. 2009, 7: 185-195. 10.1038/nrmicro2032.

Pao SS, Paulsen IT, Saier MH: Major facilitator Superfamily. Microbiol Mol Biol R. 1998, 62: 1-34.

Lingner U, Münch S, Deising HB, Sauer N: Hexose transporters of a hemibiotrophic plant pathogen: Functional variations and regulatory differences at different stages of infection. J Biol Chem. 2011, 286: 20913-20922. 10.1074/jbc.M110.213678.

Mach-Aigner A, Gudynaite-Savitch L, Mach RL: L-arabitol is the actual inducer of xylanase expression in Hypocrea jecorina (Trichoderma reesei). Appl Environ Microbiol. 2011, 77: 5988-5994. 10.1128/AEM.05427-11.

Seiboth B, Pakdaman BS, Hartl L, Kubicek CP: Lactose metabolism in filamentous fungi: how to deal with an unknown substrate. Fungal Biol Rev. 2007, 21: 42-48. 10.1016/j.fbr.2007.02.006.

Faghihi MA, Wahlestedt C: Regulatory roles of natural antisense transcripts. Nature Rev. 2009, 10: 637-643. 10.1038/nrm2738.

Dang Y, Yang Q, Xue Z, Liu Y: RNA interference in fungi: pathways, functions and applications. Eukaryot Cell. 2011, 10: 1148-1155. 10.1128/EC.05109-11.

Druzhinina IS, Schmoll M, Seiboth B, Kubicek CP: Global carbon utilisation profiles of wild-type, mutant, and transformant strains of Hypocrea jecorina. Appl Environ Microb. 2006, 72: 2126-2133. 10.1128/AEM.72.3.2126-2133.2006.

Nakari-Setälä T, Paloheimo M, Kallio J, Vehmaanperä J, Penttilä M, Saloheimo M: Genetic modification of carbon catabolite repression in Trichoderma reesei for improved protein production. Appl Environ Microb. 2009, 75: 4853-4860. 10.1128/AEM.00282-09.

Edgar R, Domrachev M, Lash AE: Gene Expression Omnibus: NCBI gene expression and hybridization array data repository. Nucleic Acids Res. 2002, 30: 207-210. 10.1093/nar/30.1.207.