Tạo ra các tế bào Megakaryocyte từ các tế bào gốc phôi người.

Blood - Tập 110 - Trang 1265 - 2007
Deborah L. French1, Marketa Jirouskova2, Marion Kennedy3, Barry S. Coller2, Gordon Keller3
1Gene and Cell Medicine, Mount Sinai School of Medicine, New York, NY, USA
2Laboratory of Blood and Vascular Biology, The Rockefeller University, New York, NY, USA
3McEwen Center for Regenerative Medicine, University Health Network, Toronto, ON, Canada

Tóm tắt

Tóm tắt Có khả năng tạo ra nhiều loại tế bào từ các tế bào gốc phôi người (hESC) trong môi trường nuôi cấy mang đến cơ hội chưa từng có để sản xuất nguồn cung tế bào không giới hạn cho nghiên cứu và mục đích lâm sàng. Tế bào Megakaryocyte chỉ chiếm 0.02–0.05% trong tổng số tế bào có nhân trong tủy xương, do đó làm cho chúng trở thành loại tế bào khó tách biệt và nghiên cứu. Công nghệ tế bào ES cung cấp một nguồn tài nguyên để tạo ra các tiền tế bào megakaryocyte cho phân tích in vitro và in vivo. Để phương pháp này thành công, cần có các sơ đồ phân hóa lặp lại được tạo ra đủ số lượng tế bào. Với một quy trình dựa trên cơ thể phôi (EB), trong môi trường không có huyết tương, chúng tôi có thể tạo ra các quần thể huyết học với tiềm năng megakaryocyte từ hai dòng hESC khác nhau; H1 và HES2. Sử dụng CD41 như một dấu hiệu sớm của quá trình tạo huyết xác định, chúng tôi phát hiện rằng 4 đến 12% quần thể EB vào ngày 11–12 thể hiện mức cao của dấu hiệu (CD41Hi) trong khi 10 đến 20% thể hiện mức thấp của dấu hiệu (CD41Lo). Tế bào từ quần thể CD41Hi nhưng không phải quần thể CD41Lo thể hiện dấu hiệu megakaryocyte GPIb. Để phân tích thêm các quần thể này, cả hai đã được tách biệt từ EB ngày 12 bằng phương pháp phân loại tế bào và được nuôi cấy trong môi trường có TPO và SCF. Sau vài ngày trong môi trường nuôi cấy, quần thể CD41Hi thể hiện mức GPIb tăng lên, như xác định bởi phép phân tích dòng tế bào và PCR thời gian thực. PF4 được phát hiện trong quần thể CD41Hi đã được tách biệt và mức độ tăng gấp 10 lần sau khi nuôi cấy. Những tế bào này cũng bám vào fibrinogen và collagen và có dấu hiệu dương tính với yếu tố von Willebrand (vWF) và P-selectin. Sau khi kích hoạt bởi PAR1, các tế bào đã liên kết với fibrinogen hòa tan và thể hiện P-selectin trên bề mặt của chúng. Không có hoặc rất ít tiền thân được phát hiện trong phân đoạn CD41Hi bằng các xét nghiệm thuộc địa, cho thấy quần thể này chứa các tế bào đã cam kết vào dòng tế bào megakaryocyte. Sự ủ của quần thể tế bào CD41Lo trong sự hiện diện của TPO dẫn đến 70–80% tế bào thể hiện mức độ CD41 và GPIb tăng lên. Kỹ thuật nhuộm miễn dịch đã chỉ ra sự phát hiện vWF và P-selectin sau khi các tế bào bám vào fibrinogen và collagen. Cả việc gắn fibrinogen và thể hiện P-selectin trên bề mặt đều được phát hiện sau khi kích hoạt bằng PAR1. Phân tích PCR định lượng cho thấy mức độ PF4 trong quần thể đã được phân loại ở mức thấp, với sự gia tăng gấp 3 lần sau khi ủ trong sự hiện diện của TPO. Các tế bào tiền thân đã được phát hiện trong các xét nghiệm thuộc địa, cho thấy quần thể tế bào này chứa các tiền thân giống megakaryocyte. Tổng hợp lại, những phát hiện này chứng minh khả năng tạo ra hiệu quả và lặp lại các tế bào megakaryocyte từ hESC sử dụng quy trình EB không có huyết tương.

Từ khóa


Thông tin
Thông tin xuất bản

Blood

Tập 110

1265

Thông tin tác giả