Hiroaki Asai1, Hiroshi Fujiwara1, Toshiki Ochi1, Jun An1, Toshiaki Shirakata1, Kozo Nagai1, Yukihiro Miyazaki1, Junichi Mineno2, Kiyotaka Kuzushima3, Hiroshi Shiku4, Masaki Yasukawa1
1Bioregulatory Medicine, Ehime University Graduate School of Medicine, Toon, Japan
2Center for Cell and Gene Therapy, Takara Bio Inc., Otsu, Japan
3Immunology, Aichi Cancer Center Research Institute, Nagoya, Japan
4Departments of Cancer Vaccine and Immuno-Gene Therapy, Mie University Graduate School of Medicine, Tsu, Japan
Tóm tắt
Tóm tắt
Tóm tắt 2059
Thông tin & Mục đích:
Liệu pháp nhận chuyển nhượng tế bào T nằm hướng đến kháng nguyên ung thư thông qua việc chuyển giao gen thụ thể tế bào T (TCR) đặc hiệu đã chứng minh tiềm năng, tuy nhiên hiệu quả lâm sàng của nó vẫn chưa đạt được như mong đợi. Một trong những nguyên nhân là sự tích lũy số lượng tế bào T đã chuyển hướng vào vị trí khối u tại chỗ vẫn còn thấp. Để tích lũy các tế bào T phản ứng với khối u đó trong vi môi trường khối u, chemokine được sản xuất bởi các tế bào khối u và/hoặc các tế bào liên quan đến khối u là một mục tiêu hấp dẫn. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã xem xét tính khả thi của việc chuyển giao gen thụ thể chemokine CC 2 (CCR2) vào các tế bào T trước khi chuyển hướng chúng đến WT1 nhằm tăng cường khả năng phản ứng chống ung thư, cả trong ống nghiệm và trong cơ thể sống.
Phương pháp:
Các gen TCR-a/b đặc hiệu đối với WT1235–243 và bị hạn chế bởi HLA-A*24:02 đã được giới thiệu vào các tế bào T CD8+ bình thường bằng cách sử dụng vector biểu hiện gen TCR retrovirus mới của chúng tôi, bao gồm cả các yếu tố điều tiết cho TCR nội sinh (vector WT1-si-TCR). Biểu hiện mRNA của tổng số 11 chemokine được sản xuất bởi 10 dòng tế bào ung thư phổi người được kiểm tra bằng QRT-PCR, sau đó CCL2 (được sản xuất biến thiên trong 7 trên 10 dòng tế bào đã kiểm tra) và dòng tế bào ung thư phổi nhỏ, LK79, đã sản xuất CCL2 một cách phong phú được chọn cho chứng minh khái niệm. Gen CCR2 đã được giới thiệu vào tế bào Jurkat, tế bào Jurkat/MA, và tế bào T CD8+ bình thường tương tự nhiều lần được chuyển hướng trước đó bằng cách sử dụng vector WT1-siTCR. CCR2 được giới thiệu đã được xác thực bằng cách sử dụng máy phân tích dòng tế bào và thử nghiệm transwell. Độ độc tế bào đã được kiểm tra bằng cách sử dụng xét nghiệm giải phóng 51chromium chuẩn. Chức năng hợp tác được tạo thành từ sự chỉ định CCL2 và tính chất độc hại chống khối u đặc hiệu WT1 do các tế bào chuyển gen đôi này trung gian đã được kiểm tra trong mẫu trong ống nghiệm; giá trị LDH được giải phóng từ các tế bào LK79 bị hủy diệt trong đĩa phía dưới bởi tế bào T CD8+ chuyển gen đôi di chuyển từ đĩa phía trên đã được đo lường. Hoạt động chống khối u trong cơ thể sống được đánh giá bằng cách sử dụng mô hình chuột xenograft với tế bào LK79 đã truyền luciferase (LK79-luc). Tác động trực tiếp của liên kết CCL2 lên tín hiệu WT1-TCR trong tế bào trung gian chuyển gen đôi được đánh giá bằng cách sử dụng xét nghiệm luciferase với dòng tế bào Jurkat/MA đã chuyển gen đôi là TCR−, dòng tế bào này thể hiện hoạt động bền vững của hCD8a và các gen báo cáo NFAT-luciferase (Jurkat/MA/CD8a/luc; được cung cấp tốt bụng bởi GS. Erik Hooijberg, Hà Lan).
Kết quả:
Sự nhạy cảm với CCL2 đã được giới thiệu thành công thông qua việc chuyển giao gen CCR2; tế bào Jurkat đã chuyển gen CCR2 thành công hướng đến dòng tế bào sản xuất CCL2, tế bào LK79. Việc chuyển giao gen CCR2 không làm cản trở tính độc hại đặc hiệu WT1 do tế bào T CD8+ trước đó được chuyển hướng bằng cách sử dụng chuyển giao gen WT1-siTCR, mà thay vào đó, việc chuyển gen đôi đã hợp tác trang bị cho các tế bào chuyển gen đó khả năng nhạy cảm với CCL2 và tính độc hại đặc hiệu WT1 chống lại tế bào LK79. Hơn nữa, trong xét nghiệm in vivo sử dụng mô hình chuột xenograft, sự tăng trưởng của các tế bào LK79-luc được tiêm dưới da bị ức chế hiệu quả hơn bởi các tế bào T CD8+ đã chuyển gen đôi so với các tế bào chuyển gen đơn WT1-siTCR, đặc biệt là ngay sau khi chuyển giao nhận. Cuối cùng, CCL2 đã tăng cường một cách cộng hưởng độ lớn của tín hiệu WT1-TCR kích hoạt bởi peptide liên kết theo kiểu liên kết phụ thuộc liều lượng. Ngay cả khi không có liên kết peptide WT1, tín hiệu TCR như vậy cũng đã được kích hoạt bởi CCL2 đến một mức độ nào đó.
Kết luận:
Trong nghiên cứu này, các kết quả của chúng tôi cho thấy rằng việc thúc đẩy biểu hiện của CCR2 trên tế bào CTL trước khi được chuyển hướng đến WT1 đã tăng cường tính phản ứng chống ung thư của nó cả in vitro lẫn in vivo. Sự tăng cường phản ứng chống khối u in vivo này có thể do số lượng tế bào hiệu ứng tăng lên và tín hiệu WT1-TCR được tăng cường do CCL2 trong vi môi trường khối u tại chỗ. Mặc dù cần có thêm các nghiên cứu, việc chuyển giao gen CCR2 vào các CTL phản ứng với khối u đặc hiệu WT1 được chuyển hướng có thể khả thi trong điều trị ung thư ở người.
Các khai báo:
Không có xung đột lợi ích liên quan nào cần tuyên bố.
