Phân Tích Hoạt Động Bùng Nổ Hô Hấp Trong Tế Bào Phagocyte Bằng Hydroethidine Và 2′,7′-Dichlorofluorescin

Hydroethidine (HE) và 2′,7′-dichlorofluorescin (DCFH) đã được sử dụng để đo lường các sản phẩm chuyển hóa oxy phản ứng trong bạch cầu bằng phương pháp phân tích dòng tế bào. Cả Hydroethidine và DCFH đều bị oxy hóa nhanh chóng trong một thử nghiệm ống nghiệm không tế bào thành bromide ethidium (EB) và 2′,7′-dichlorofluorescein (DCF) bởi H2O2 và peroxidase, nhưng không bởi H2O2 một mình, trong khi chỉ HE bị oxy hóa bởi KO2, một nguồn O-2. Các bạch cầu lympho, đơn nhân và bạch cầu đa nhân trung tính nghỉ ngơi tự phát oxy hóa HE thành EB, trong khi DCFH chỉ bị oxy hóa ở mức thấp. Bạch cầu đa nhân trung tính tăng lên 6,9 lần về độ phát quang đỏ của EB và 12,5 lần về độ phát quang xanh của DCF trong quá trình bùng nổ hô hấp được kích thích bởi phorbol 12-myristate 13-acetate hoặc 6,1 lần và 4,7 lần, tương ứng, trong quá trình bùng nổ hô hấp được kích thích bởi vi khuẩn Escherichia coli. Oxy hóa HE hoặc DCFH trong quá trình bùng nổ hô hấp, không giống như oxy hóa HE tự phát, không bị ức chế bởi 10 mM NaN, cho thấy nguồn gốc không phải ti thể của các chất ôxy hóa tế bào trong quá trình bùng nổ hô hấp, chẳng hạn như NADPH oxidase, là chất sản xuất O-2. Oxy hóa DCFH, nhưng không phải HE, đã giảm trong các bạch cầu đa nhân trung tính được kích thích, những tế bào này đồng thời được nạp HE và DCFH. Oxy hóa DCFH nội bào do sự ủ của bạch cầu đa nhân trung tính nghỉ ngơi với H2O2 ngoại bào không bị ảnh hưởng bởi sự hiện diện của HE. Điều này cho thấy rằng HE bị oxy hóa ở một bước sớm hơn trong chuyển hóa oxy phản ứng của bạch cầu đa nhân trung tính so với DCFH, tức là, bởi các sản phẩm chuyển hóa oxy sớm như O2-, trong khi DCFH phần nào bị oxy hóa bởi H2O2 và peroxidase trong phago. Việc oxy hóa khác nhau giữa HE và DCFH trong quá trình nhuộm tế bào đồng thời cho phép phân tích tối đa ba quần thể bạch cầu đa nhân trung tính khác nhau về chức năng ở bệnh nhân nhiễm trùng huyết. Điều này có ý nghĩa cho việc xác định các thay đổi liên quan đến bệnh trong chuyển hóa oxy ở bạch cầu nghỉ ngơi và được kích thích.