Gen luciferase của đom đóm: cấu trúc và biểu hiện trong tế bào động vật có vú.

Chuỗi nucleotide của gen luciferase từ đom đóm Photinus pyralis đã được xác định thông qua phân tích cDNA và các mẫu gen. Gen này chứa sáu intron, tất cả đều có độ dài dưới 60 nucleotid. Đầu 5' của mRNA luciferase đã được xác định thông qua phân tích enzym S1 nuclease và mở rộng mồi. Mặc dù mẫu cDNA luciferase thiếu sáu mã di truyền N-đầu của khung đọc mở, chúng tôi đã có thể tái tạo lại tương đương với cDNA toàn bộ chiều dài bằng cách sử dụng mẫu gen như nguồn để lấy đoạn 5' còn thiếu. Gen luciferase toàn bộ chiều dài, không có intron đã được chèn vào các vector biểu hiện ở động vật có vú và được đưa vào các tế bào khỉ (CV-1) trong đó luciferase của đom đóm hoạt động enzym đã được biểu hiện tạm thời. Ngoài ra, các dòng tế bào biểu hiện luciferase đom đóm một cách ổn định đã được phân lập. Việc xóa một phần của vùng không dịch mã 5'-của gen luciferase đã loại bỏ một mã khởi đầu (AUG) nằm ở phía thượng lưu và dẫn đến sự gia tăng gấp đôi mức độ biểu hiện luciferase. Khả năng của gen luciferase toàn bộ chiều dài trong việc kích hoạt các promoter ẩn hoặc không có enhancer cũng bị suy giảm hoặc loại bỏ bởi việc xóa 5' này. Việc xét nghiệm biểu hiện luciferase cung cấp một phương pháp nhanh chóng và chi phí thấp để theo dõi hoạt động của các promoter. Tùy thuộc vào thiết bị được sử dụng để phát hiện hoạt động luciferase, chúng tôi ước tính rằng phương pháp thử nghiệm này nhạy hơn từ 30 đến 1,000 lần so với xét nghiệm biểu hiện acetyltransferase chloramphenicol.