Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Đánh giá protein huỳnh quang xanh tái tổ hợp, dưới các điều kiện nuôi cấy khác nhau và tinh chế bằng nhựa sắc ký tương tác kỵ nước HiTrap
Tóm tắt
Để xác định ảnh hưởng của các điều kiện nuôi cấy khác nhau, các tế bào chuyển gene của Escherichia coli biểu hiện protein huỳnh quang xanh tái tổ hợp (GFPuv) đã được nuôi trong chín môi trường với bốn điều kiện biến đổi (lưu trữ môi trường nuôi cấy đã inoculated ở 4°C trước khi ủ, tốc độ khuấy, nồng độ isopropyl-β-d-thiogalactopyranoside [IPTG] và thời gian cảm ứng). Các tế bào lắng được hòa tan trong dung dịch chiết xuất và trải qua phương pháp chiết xuất phân đoạn ba pha (TPP). Để xác định nhựa tinh chế thích hợp nhất, các chiết xuất protein đã được elute qua một trong bốn loại cột sắc ký tương tác kỵ nước (HIC) HiTrap được chuẩn bị trước bằng nhựa methyl, butyl, octyl hoặc phenyl và được phân tích thêm trên gel polyacrylamide sodium dodecyl sulfate 12%. Với việc nhuộm Coomassie, một dải duy nhất giữa 27 (GFPuv chuẩn) và 29 kDa (chuẩn trọng lượng phân tử) đã được quan sát cho từng mẫu cột HIC. Chiết xuất TPP với elution HIC đã cung cấp khoảng 90% GFPuv thu hồi và sự giàu có GFPuv gấp tám lần liên quan đến khối lượng riêng. Tốc độ quay và nồng độ IPTG cho thấy, tương ứng, ảnh hưởng tiêu cực lớn hơn và ảnh hưởng tích cực đến sự biểu hiện GFPuv ở đầu pha logarithmic cho các điều kiện nuôi cấy đã đặt ra (37°C, 24 giờ ủ).
Từ khóa
#Escherichia coli #protein huỳnh quang xanh tái tổ hợp #GFPuv #phương pháp chiết xuất phân đoạn ba pha #sắc ký tương tác kỵ nước HiTrap #nồng độ IPTGTài liệu tham khảo
Chalfie, M. and Kain, S. (1998), in Green Fluorescent Protein Properties: Applications and Protocols. Chalfie, M. and Kain, S., eds., Wiley-Liss, New York, NY, pp. 3–75.
Wheelwright, S. M. (1991), Protein Purification, Design and Scale Up of Downstream Processing. Wheelwright, S. M., ed., John Wiley & Sons, New York, NY, pp. 154–162.
Sambrook, J., Fritsch, E. F., and Maniatis, T. (1989), in Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd Ed., Nolan, C., ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, pp. 1.74–1.84.
Vessoni Penna, T. C., Chiarini, E., Machoshvili, I. A., Ishii, M., and Pessoa Jr., A. (2002). Appl. Biochem. Biotechnol. 98–100, 791–802.
Denninson, C., and Lovrien, R. (1997), Protein Expr. Purif. 11, 149–161.
Sharma, A. and Gupta, M. N. (2001), Process Biochem. 37, 193–196.
Vessoni Penna, T. C., Chiarini, E., and Pessoa Jr., A. (2003), Appl. Biochem Biotechnol. 105–108, 481–491.
Drapper, N. and Smith, H. (1981), Applied Regression Analysis John Wiley, New York, NY.
Scopes, R. K. (1993), in Protein Purification: Principles and Practice. 3rd Ed., Cantor, C. R., ed., Springer-Verlag, New York, NY, pp. 39–89, 324–325.
Shi, H. and Su, W. W. (2001), Enzyme Microb. Technol. 28, 25–34.
Yakhnin, A. A., Vinokurov, L. M., Surin, A. K., and Alalhov, Y. B. (1998), Protein Expr. Purif. 14, 382–386.