Masahiro Ogasawara1, Tomohiro Yamakawa1, Yuki Katsura1, Kanako Shima1, Toshihiro Matsukawa1, Minoru Kanaya1, Koichiro Minauchi1, Masanobu Nakata1, Shuichi Ota1, Kiyotoshi Imai1, Teiichi Hirano1, Naoki Kobayashi1, Yoshio Kiyama1, Naoto Hirano2
1Internal Medicine, Sapporo Hokuyu Hospital, Sapporo, JAPAN
2Dana-Farber Cancer Institutue, Boston, MA, USA
Tóm tắt
Tóm tắt
Tóm tắt 2101
Thông tin nền và mục tiêu:
Thành công gần đây liên quan đến việc chuyển giao tế bào T chống khối u cho bệnh nhân đã bị suy giảm miễn dịch cho thấy tiềm năng của liệu pháp miễn dịch nhận nuôi có thể có tác động lâm sàng đáng kể. Tuy nhiên, việc sử dụng rộng rãi liệu pháp nhận nuôi đã bị cản trở bởi sự khó khăn trong việc liên tục tạo ra các lymphocyte chống khối u mạnh mẽ trong thời gian hợp lý cho mỗi bệnh nhân. Để khắc phục điều này, chúng tôi đã báo cáo trước đây về một hệ thống nuôi cấy có thể tạo ra một cách lặp đi lặp lại các tế bào T cytotoxic (CTL) đặc hiệu kháng nguyên từ bệnh nhân melanoma HLA-A2 dương tính bằng cách sử dụng tế bào trình diện kháng nguyên nhân tạo dựa trên K562 (aAPCs). Trong nghiên cứu hiện tại, chúng tôi đã áp dụng hệ thống nuôi cấy cho HLA-A24, một trong những kháng nguyên HLA lớp I phổ biến nhất trong quần thể châu Á, và xem xét xem CTL đặc hiệu WT1 bị hạn chế bởi HLA-A2402 có thể được tạo ra bằng cách sử dụng aAPCs hay không.
Phương pháp:
Các tế bào đơn nhân máu ngoại vi (PBMC) dương tính với HLA-A2402 đã được thu thập từ các tình nguyện viên khỏe mạnh (n=4) và bệnh nhân ung thư (n=10). Để thiết lập các tế bào T đặc hiệu kháng nguyên, các tế bào T CD8+ được tinh chế bằng phương pháp tách chọn dương tính sử dụng hạt từ tính (Miltenyi Biotec). aAPCs đã được kích hoạt với peptide WT1 9-mer đã được sửa đổi và hạn chế bởi HLA-A2402 (CYTWNQMNL). aAPCs sau đó đã được chiếu xạ với 200 Gy và được thêm vào các tế bào T CD8+ đã tinh chế theo tỷ lệ 1:20 trong các đĩa 96 giếng trong môi trường RPMI1640 bổ sung huyết thanh người AB 10%. Giữa các lần kích thích, IL-2 (10 U/ml) và IL-15 (10 ng/ml) (cả đều từ Peprotech) đã được thêm vào các môi trường nuôi cấy.
Kết quả:
Phân tích cytometry kiểu chảy (FACS) xác nhận rằng aAPCs đã biểu hiện ổn định các phân tử HLA lớp I, CD80 và CD83 đã được chuyển giao. aAPC không biểu hiện các phân tử HLA lớp II, CD40, CD154 hoặc CD86. Sau 3–4 lần kích thích hàng tuần với aAPCs được kích hoạt bằng peptide, các tế bào T CD8+ đặc hiệu peptide WT1 đã được đánh giá bằng phương pháp nhuộm tetramer. Tỷ lệ tế bào dương tính với tetramer là 0.082±0.0075% trước khi kích thích. Nó đã tăng lên 0.865±0.528% (tăng 10.5 lần) và 1.89±1.12% (tăng 23.0 lần) sau khi kích thích lần thứ ba và thứ tư, tương ứng. Không có sự khác biệt đáng kể nào trong độ lớn của sự gia tăng giữa các tình nguyện viên khỏe mạnh và bệnh nhân ung thư. Tuy nhiên, khi các tế bào T CD8+ từ bệnh nhân được tiêm chủng bằng các tế bào dendritic được kích hoạt bằng peptide WT1 được kích thích với aAPCs được kích hoạt bằng peptide WT1, tỷ lệ tế bào dương tính với tetramer cao hơn đáng kể (11.72±6.46%) sau lần kích thích thứ ba. Các tế bào T CD8+ được kích thích bằng aAPCs kích hoạt bằng peptide WT1 là âm tính đối với cả tetramer A0201/WT1 và A2402/CMV, xác nhận sự hạn chế HLA và tính đặc hiệu kháng nguyên. Phân tích FACS cho thấy rằng CTLs đặc hiệu WT1 mở rộng với aAPCs kích hoạt bằng peptide WT1 biểu hiện kiểu hình bộ nhớ. Hơn nữa, các CTLs này thể hiện độc tính chống lại các tế bào mục tiêu CIR-A2402 được kích hoạt bằng peptide WT1 trong một bài kiểm tra giải phóng LDH. Các tế bào mục tiêu không kích hoạt hoặc được kích hoạt bằng peptide HIV không bị lysis.
Kết luận:
Các kết quả này đã chứng minh rằng các CTLs đặc hiệu WT1 hạn chế HLA-A24 với kiểu hình bộ nhớ có thể được tạo ra ex vivo bằng cách sử dụng aAPCs kỹ thuật gene được kích hoạt bằng peptide trong một khoảng thời gian ngắn cho mục đích lâm sàng.
Các công bố:
Không có xung đột lợi ích nào liên quan để công bố.
