EYA4 ức chế sự phát triển và xâm lấn của ung thư biểu mô gan bằng cách ức chế sự chuyển hóa transactivation RAP1 phụ thuộc vào NF‐κB

Wiley - 2018
Shi-Jing Mo1,2, Hongguo Xu1,2, Xiao-Yi Hao2,1, Jinhua Cai2, Xin Liu2, Wei Chen2, Chen Dong2, Xiaoyu Yin2
1Shi-Jing Mo, Xun Hou and Xiao-Yi Hao contributed equally to this manuscript
2Department of Pancreatobiliary Surgery, The First Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, No. 58, Zhongshan Er Road, Guangzhou, 510080 Guangdong, P. R. China

Tóm tắt

Những điểm chínhNền tảngCác nghiên cứu trước đây của chúng tôi đã chứng minh rằng gen homolog 4 của mắt (EYA4), một thành viên của gia đình EYA liên quan đến sự phát triển của mắt ở Drosophila, thường bị methyl hóa và bị tắt trong các mẫu ung thư biểu mô gan (HCC) và có liên quan đến thời gian sống ngắn hơn. Công việc hiện tại nhằm khám phá các cơ chế mà qua đó EYA4 hoạt động như một chất ức chế khối u trong HCC.Phương phápCác mẫu plasmid biểu hiện EYA4 ổn định (pEYA4) của các dòng tế bào HCC người Huh-7 và PLC/PRF/5 (PLC) đã được thiết lập. Các khối u xenograft được hình thành thông qua việc tiêm dưới da các mẫu transfectants ổn định vào chuột nude BALB/c. Mẫu mô được thu thập từ 75 bệnh nhân HCC được chẩn đoán bệnh lý. Phân tích phản ứng chuỗi polymerase thời gian thực định lượng, Western blot và nhuộm mô miễn dịch đã được thực hiện để xác định sự biểu hiện của EYA4 trong các dòng tế bào, xenografts và mẫu lâm sàng. Sự sinh sản của tế bào, sự hình thành thuộc địa, khả năng xâm lấn và sự hình thành khối u của các transfectants ổn định đã được nghiên cứu. Một microarray biểu hiện gen đã được sử dụng để sàng lọc các gen được điều chỉnh bởi sự biểu hiện EYA4. Ảnh hưởng của EYA4 đối với tín hiệu protein 1 (RAP1)/Yếu tố nhân κB (NF‐κB) đã được chứng minh thông qua việc đồng chuyển gen pEYA4 và plasmid biểu hiện gen protein RAP1A đánh dấu Flag (Flag‐RAP1A), các nghiên cứu chức năng, phân tích miễn dịch histochromatin, nhuộm miễn dịch huỳnh quang và thử nghiệm ubiquitin hóa tế bào.Kết quảViệc khôi phục sự biểu hiện của EYA4 trong các dòng tế bào HCC đã ức chế sự sinh sản của tế bào, ức chế sự phát triển thuộc địa, giảm sự xâm lấn của tế bào và kiềm chế sự phát triển của khối u xenograft, và Flag‐RAP1A đã đảo ngược các hiệu ứng ức chế của pEYA4 trong ống nghiệm. Sự kích hoạt NF‐κB với yếu tố hoại tử khối u α (TNF‐α) đã làm tăng sự liên kết của p65 với trình điều khiển gen RAP1A và làm tăng biểu hiện protein RAP1. Sự ức chế NF‐κB bằng BAY 11‐7085 và siRNA p65 đã thành công trong việc chặn quá trình tăng RAP1 gây ra bởi TNF‐α. EYA4 đã đối kháng với sự phosphoryl hóa và ubiquitin hóa có tính chất ức chế của NF‐κBα (IκBα) gây ra bởi TNF‐α cũng như sự chuyển vị vào nhân và sự hoạt hóa của p65, dẫn đến hoạt động NF‐κB và biểu hiện RAP1 bị ức chế. Việc chặn hoạt động phosphatase serine/threonine của EYA4 bằng calyculin A đã đặc biệt làm mất hiệu quả ức chế của nó đối với hoạt động NF‐κB. Thêm vào đó, sự biểu hiện của EYA4 có mối tương quan nghịch với hoạt động IκBα/RAP1 trong các mẫu HCC lâm sàng.Kết luậnNhững phát hiện của chúng tôi cung cấp một nền tảng chức năng và cơ chế để xác định EYA4 như một chất ức chế khối u thật sự, phá vỡ sự kích hoạt bất thường của con đường tín hiệu NF‐κB/RAP1 và do đó điều phối một trở ngại sinh lý đối với sự phát triển và xâm lấn của HCC.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

10.1002/ijc.29210

Ferlay J, 2013, GLOBOCAN 2012 v1.0, cancer incidence and mortality worldwide: IARC CancerBase No. 11

10.1186/s40880‐017‐0234‐3

10.1056/NEJMra1001683

10.5732/cjc.014.10136

10.1056/NEJMoa0708857

10.1016/S1470‐2045(08)70285‐7

10.1016/S1470‐2045(09)70171‐8

10.1634/theoncologist.2011‐0465

10.1146/annurev.biochem.76.052705.164916

10.1038/nature02097

10.1016/S0092‐8674(00)80480‐8

10.1038/nature02083

10.1074/jbc.C900032200

10.1038/nature07849

10.1038/nature08138

10.1038/onc.2010.122

10.1038/onc.2009.360

10.1158/1055‐9965.EPI‐04‐0506

10.1371/journal.pone.0002079

10.1016/j.molonc.2009.03.004

10.1016/j.canlet.2016.06.021

10.1245/s10434‐013‐3401‐z

10.1097/CAD.0b013e328364f935

10.1101/gad.1228704

10.1038/nature04870

10.1016/j.cell.2008.01.020

10.1038/sj.onc.1203239

10.1016/j.ajpath.2012.10.023

10.1158/0008‐5472.CAN‐08‐4269

10.1074/jbc.M113.536227

10.1172/JCI77927

10.1158/1541‐7786.MCR‐13‐0435‐T

Li X, 2013, The clinical significance of HER‐2 and NF‐KB expression in gastric cancer, Hepatogastroenterology, 60, 1519

10.1016/j.tibs.2004.11.009

Thông tin
Thông tin xuất bản

Wiley

Thông tin tác giả