Judith Juliana De Vries1, Chantal Visser1, Lotte Geers1, Johan A. Slotman2, Henrik Endeman3, Marieke J.H.A. Kruip1, Moniek P.M. de Maat1, The Dutch COVID & Thrombosis Coalition4
1Department of Hematology, Erasmus MC, University Medical Center Rotterdam, Rotterdam, Netherlands
2Optical Imaging Centre, Department of Pathology, Erasmus MC, University Medical Center Rotterdam, Rotterdam, Netherlands
3Department of Adult Intensive Care, Erasmus MC, University Medical Center Rotterdam, Rotterdam, Netherlands
4Erasmus MC, University Medical Center Rotterdam, Rotterdam, Netherlands
Tóm tắt
Tóm tắt
Giới thiệu: SARS-CoV-2 gây ra một đại dịch toàn cầu, với gần 200 triệu ca nhiễm đã được xác nhận. Nhiễm SARS-CoV-2 có thể dẫn đến nhiều trạng thái bệnh lý, từ các triệu chứng nhẹ ở phần lớn ca bệnh đến các bệnh nặng, liên quan đến sự gia tăng tỷ lệ huyết khối tĩnh mạch (VTE). Chúng tôi giả thuyết rằng sự thay đổi cấu trúc mạng lưới fibrin góp phần vào VTE ở bệnh nhân COVID-19 bằng cách ảnh hưởng đến độ ổn định của cục máu đông và độ nhạy với fibrinolysis. Bằng cách nghiên cứu mạng lưới fibrin của bệnh nhân COVID-19, chúng tôi nhằm mục tiêu giải mã các cơ chế góp phần vào nguy cơ VTE tăng lên ở bệnh nhân COVID-19.
Phương pháp: Từ tháng 4 năm 2020 đến tháng 12 năm 2020, chúng tôi đã thu thập mẫu huyết tương từ các bệnh nhân COVID-19 nhập viện ở đơn vị chăm sóc đặc biệt (ICU) của Trung tâm Y tế Erasmus. Chúng tôi bao gồm các bệnh nhân có VTE đã được xác nhận qua chụp cắt lớp vi tính (CT-angiography) và bệnh nhân COVID-19 không có VTE đã xác nhận trong thời gian nhập viện ICU. Mẫu được thu thập lúc nhập viện ICU và sau khi VTE đã xác nhận hoặc vào thời điểm tương tự ở các bệnh nhân ICU không có VTE. Ngoài ra, chúng tôi đã thu thập huyết tương từ bệnh nhân COVID-19 khi nhập viện ở khoa bình thường không có VTE đã xác nhận và từ các đối tượng khỏe mạnh. Cục máu đông được hình thành bằng cách trộn huyết tương đã giải citrat với thrombin (nồng độ cuối 1 U/ml) và canxi (17 mM). Chúng tôi đã hình ảnh hóa các cục máu đông bằng kính hiển vi phát quang kích thích (STED), một kỹ thuật siêu phân giải trong đó laser làm suy giảm được sử dụng để tắt có chọn lọc các fluorophore xung quanh điểm tiêu cự, do đó tăng độ phân giải. Trong những hình ảnh này, đường kính sợi fibrin được đo bằng cách sử dụng plugin Độ Dày Địa Phương của ImageJ. Mật độ sợi được định lượng dưới dạng phần trăm của diện tích trong Z-stacks của hình ảnh kính hiển vi huỳnh quang. Cuối cùng, một thử nghiệm tiêu huyết lạnh dựa trên độ đục đã được sử dụng để xác định độ nhạy với fibrinolysis (thời gian lysis cục máu đông) và mật độ cục máu đông (sự khác biệt giữa độ hấp thụ tối đa và cơ bản). Sự khác biệt trong các đặc tính của mạng lưới fibrin giữa các nhóm được kiểm tra bằng cách sử dụng ANOVA Một Chiều cùng với các bài kiểm tra Bonferroni và hồi quy tuyến tính có và không điều chỉnh mức fibrinogen.
Kết quả: Chúng tôi đã bao gồm 21 bệnh nhân ICU COVID-19 có VTE đã xác nhận, 20 bệnh nhân ICU COVID-19 không có VTE đã xác nhận, 10 bệnh nhân COVID-19 ở khoa và 7 đối tượng khỏe mạnh. Tuổi trung bình giữa các nhóm tương đương, trong khi chỉ số BMI cao hơn ở các bệnh nhân COVID-19 so với các đối tượng khỏe mạnh (Bảng 1). Mức fibrinogen, D-dimer và anti-Xa cao hơn đáng kể ở bệnh nhân ICU COVID-19 so với bệnh nhân COVID-19 ở khoa và các đối tượng khỏe mạnh. Mức FVIII cao hơn đáng kể ở bệnh nhân ICU COVID-19 so với các đối tượng khỏe mạnh, trong khi mức FXIII lại thấp hơn đáng kể.
Khi nhập viện vào ICU, mật độ cục máu đông cao hơn đáng kể ở bệnh nhân ICU COVID-19 có và không có VTE đã xác nhận so với các đối tượng khỏe mạnh (Hình 1 và Bảng 2). Tuy nhiên, sau khi điều chỉnh cho mức fibrinogen, sự khác biệt này biến mất. Thời gian lysis cục máu đông dài hơn rõ rệt ở cục máu đông từ bệnh nhân ICU COVID-19 so với cục từ các đối tượng khỏe mạnh, bất kể mức fibrinogen (Bảng 2). Các bệnh nhân ICU COVID-19 có VTE đã xác nhận cũng cho thấy thời gian lysis cục máu đông dài hơn đáng kể so với bệnh nhân COVID-19 ở khoa. Điều thú vị là, trong thử nghiệm tiêu huyết, fibrinolysis không xảy ra ở 25% bệnh nhân ICU COVID-19 có VTE so với 9.5% bệnh nhân ICU COVID-19 không có VTE (Hình 2). Sự ngừng fibrinolysis này chưa bao giờ được quan sát trong cục máu đông từ các đối tượng khỏe mạnh và bệnh nhân COVID-19 ở khoa. Đường kính sợi fibrin tương đương giữa các nhóm.
Trong các cục máu đông từ các mẫu huyết tương thu thập khi nhập viện vào ICU, không có sự khác biệt nào giữa bệnh nhân ICU COVID-19 có và không có VTE (Hình 2). Tuy nhiên, khi so sánh các cục máu đông được chuẩn bị từ huyết tương thu thập tại thời điểm thứ hai (sau khi có VTE hoặc tại thời điểm tương tự cho các bệnh nhân không có VTE), chúng tôi quan sát thấy thời gian lysis cục máu đông dài hơn đáng kể ở các bệnh nhân có VTE đã xác nhận (97.4 [88.5-158.8] phút) so với các bệnh nhân không có VTE đã xác nhận (80.0 [76.0-97.8] phút) (p=0.03).
Cuối cùng, không có sự thay đổi đáng kể nào giữa các cục máu đông từ huyết tương trước và sau VTE hoặc giữa hai thời điểm ở các bệnh nhân không có VTE, ngoại trừ một thời gian lysis cục máu đông giảm dần theo thời gian đối với các bệnh nhân ICU COVID-19 không có VTE đã xác nhận.
Kết luận: Kết quả của chúng tôi gợi ý rằng nhiễm SARS-CoV-2 làm tăng mật độ cục máu đông và giảm độ nhạy của cục đối với fibrinolysis, và rằng những thay đổi này liên quan đến mức độ nghiêm trọng của bệnh.
Hình 1 Hình 1.
Các công bố
Kruip: Daiichi Sankyo: Tài trợ Nghiên cứu; Bayer: Thù lao, Tài trợ Nghiên cứu.
