Xác định Thiamine trong Bột Lúa Mì Sử Dụng Phương Pháp HPLC-Phát Huỳnh Quang Được Xác Minh và Tối Ưu Trước Bằng Thiết Kế Box–Behnken

Mục đích chính của nghiên cứu này là tối ưu hóa và xác minh một phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao isocratic mới để phân tích thiamine trong bột lúa mì. Thiamine đã được biến đổi thành thiochrome trước đó và được xác định bằng phát hiện huỳnh quang (bước sóng kích thích, 366 nm; bước sóng phát ra, 435 nm). Pha di động bao gồm đệm phosphate (0,02 M) và chất điều chỉnh hữu cơ (methanol 88%; acetonitril 12%). Việc tối ưu hóa được thực hiện bằng cách sử dụng thiết kế Box–Behnken (ba yếu tố ở ba mức) ở đó tỷ lệ chất điều chỉnh hữu cơ (A) thay đổi từ 20 đến 90%, pH của pha di động (B) thay đổi từ 5,8 đến 7,8, và lưu lượng (C) thay đổi từ 0,5 đến 1 mL phút−1 là các biến số được nghiên cứu. Độ rộng đỉnh là phản ứng được nghiên cứu. Các điều kiện sắc ký tối ưu đã được tìm ra để giảm thiểu phản ứng là A = 90%, B = 6,00 và C = 1 mL phút−1. Sử dụng các điều kiện tối ưu, các chiết xuất thiochrome với isobutanol và chiết xuất pha rắn (SPE) sử dụng cartridge hấp phụ styrene-divinylbenzene được so sánh. Việc xác minh phương pháp, với việc sử dụng dung dịch tiêu chuẩn thiamine và cả hai loại tách thiochrome, bao gồm các nghiên cứu về tính tuyến tính, giới hạn phát hiện và định lượng, và các số liệu cảm biến phân tích và định lượng. Phương pháp bổ sung tiêu chuẩn đã được sử dụng để định lượng thiamine trong bột lúa mì. Kết quả độ chính xác tốt đã được thu được từ cả hai phương pháp chiết xuất. Tỷ lệ thu hồi dao động từ 63 đến 65% cho isobutanol và 84 đến 101% cho SPE, bao gồm chiết xuất mẫu, biến đổi thiamine, tinh sạch thiochrome và tách sắc ký. Với việc xem xét tỷ lệ thu hồi SPE tốt hơn đã thu được, độ chính xác chấp nhận được, và tác động kích thích của isobutanol lên mắt và da của người vận hành, SPE sử dụng hấp phụ styrene-divinylbenzene có thể được chọn cho việc phân tích thiamine thường quy trong các mẫu bột lúa mì.