Ian Waxman1, Dongxu Xie1, Carmella van de Ven1, Janet Ayello1, Nancy Day1, Megan S Lim2, Sherrie L. Perkins3, Mitchell S. Cairo4
1Pediatrics, Columbia University, Morgan Stanley Children's Hospital of New York Presbyterian, New York, NY, USA
2Pathology, University of Michigan, Ann Arbor, MI, USA
3Hematopathology Office, ARUP Laboratories, Salt Lake City, UT, USA
4Pediatrics, Medicine, Pathology, Columbia University Med. Ctr., New York, NY, USA
Tóm tắt
Tóm Tắt
U lymphoma B-cell trung hạt đầu tiên (PMBL) là một phân loại hiếm gặp của u lymphoma lớn B-cell khuếch tán (DLBCL) với tỷ lệ sống sót không có sự kiện thấp hơn đáng kể ở trẻ em so với những trường hợp DLBCL điều trị tương tự (Lones/Cairo, JCO, 2000). Nó có một hồ sơ biểu hiện gen độc đáo với sự gia tăng của một nhóm gen trong con đường tín hiệu NF-κB (Rosenwald, J Exp Med, 2003). Chúng tôi đã báo cáo trước đây sự gia tăng đáng kể apoptosis trong dòng tế bào PMBL với các tác nhân chặn con đường NF-κB như bortezomib (BTZ) và chất ức chế IKK phân tử nhỏ ML120B (do Millennium Pharmaceuticals, MA cung cấp) sử dụng riêng lẻ (BTZ đơn: 5.25%±1.43 tăng cường apoptosis so với đối chứng; ML120B đơn: 4.0%±1.13 tăng cường apoptosis so với đối chứng, p<0.0005) và trong sự kết hợp (ML120B+BTZ so với điều trị đơn tác nhân ML120B; tăng 17 lần trong apoptosis, p<0.01; ML120B+BTZ so với điều trị đơn tác nhân BTZ; tăng 4 lần trong apoptosis, p<0.01) (Waxman, Ann Onc, 2008a). Chúng tôi hiện đang báo cáo tác động của điều trị đơn lẻ và kết hợp trong PMBL đối với biểu hiện của protein gia đình NF-κB và mối tương quan của nó với apoptosis.
Dòng PMBL Karpas-1106P được ấp ủ với BTZ (5 ng/ml), ML120B (10 μg/ml), và ML120B+BTZ trong 24 giờ. Sự kích hoạt của các yếu tố phiên mã NF-κB được đo bằng ELISA (TransAM Kit, Active Motif) và kết quả được tương quan với các thay đổi trong apoptosis, được xác định bằng dòng tế bào với bộ phát hiện Annexin V-FITC (BD Pharmingen) sử dụng liều thuốc và thời gian ấp ủ giống hệt nhau.
Trong PMBL không được điều trị, p50 có mức kích hoạt cao nhất (0.093±0.005OD/μg protein), theo sau theo thứ tự giảm dần bởi P52 (0.045±0.0006), P65 (RelA) (0.040±0.0019), RelB (0.039±0.0016) và c-Rel (0.028±0.0036). Liệu pháp đơn với ML120B liên quan đến việc ức chế sự kích hoạt của P50 (giảm 32% so với đối chứng không được điều trị, 0.064±0.0046; p<0.01), c-Rel (giảm 31% so với đối chứng không được điều trị, 0.019±0.0004; p<0.05), P52 (giảm 16% so với đối chứng không được điều trị, 0.038±0.0019; p<0.01) và P65 (RelA) (giảm 55% so với đối chứng không được điều trị, 0.018±0.0006; p<0.001). Liệu pháp đơn với BTZ ức chế sự kích hoạt của P52 (giảm 9% so với đối chứng không điều trị, 0.041±0.0006; p<0.01) và RelB (giảm 14% so với đối chứng không được điều trị, 0.034±0.0009; p<0.05). Liệu pháp kết hợp ML120B+BTZ ức chế mạnh mẽ sự kích hoạt của P50 (giảm 45% so với đối chứng không được điều trị, 0.051±0.0015; p<0.001), P52 (giảm 50% so với đối chứng không được điều trị, 0.022±0.0002; p<0.001) và RelB (giảm 43% so với đối chứng không được điều trị, 0.023±0.0002; p<0.001).
Các kết quả này cho thấy rằng sự gia tăng apoptosis trong PMBL đã được báo cáo trước đây đối với liệu pháp đơn ML120B, liệu pháp đơn BTZ, và liệu pháp kết hợp ML120B+BTZ liên quan đến việc ức chế các thành viên của gia đình NF-κB của các yếu tố phiên mã. Các kết quả này gợi ý rằng ML120B và BTZ tăng cường apoptosis trong PMBL bằng cách ngăn chặn sự kích hoạt của các yếu tố phiên mã NF-κB và việc phiên mã tiếp theo của các gen chống apoptosis, mà nếu không sẽ thúc đẩy sự sống sót của tế bào. Vì liệu pháp kết hợp ML120B+BTZ dẫn đến việc ức chế P50 và P52 nhiều hơn so với liệu pháp đơn tác nhân, có vẻ như có hiệu ứng cộng hợp khi cả hai tác nhân được sử dụng cùng nhau. Hơn nữa, vì chỉ có ML120B ức chế sự kích hoạt của c-Rel và RelA và chỉ BTZ ức chế sự kích hoạt của RelB, rõ ràng rằng mỗi chất chặn NF-κB không ảnh hưởng đến tất cả 5 thành viên gia đình các yếu tố phiên mã NF-κB và hồ sơ biểu hiện gen do đó có thể đóng vai trò trong việc chọn liệu pháp tối ưu. Cuối cùng, phát hiện của chúng tôi cho thấy rằng ML120B và BTZ ức chế cũng sẽ tăng cường apoptosis trong các khối u khác ngoài PMBL với sự kích hoạt liên tục của con đường NF-κB và do đó những loại thuốc này nên được nghiên cứu trong các loại khối u khác với sự tăng cường của các gen NF-κB.
