Nội dung được dịch bởi AI, chỉ mang tính chất tham khảo
Xây dựng và đánh giá các vector tái tổ hợp đa điểm (Gateway) cho vi khuẩn Gram dương
Tóm tắt
Hệ thống tái tổ hợp Gateway cho phép nối các đoạn DNA một cách dễ dàng và nhanh chóng. Tại đây, chúng tôi báo cáo việc xây dựng và đánh giá ba vector Gram dương khác nhau có thể được sử dụng với hệ thống tái tổ hợp đa điểm Gateway để nhanh chóng sản xuất các sắp xếp gen mới trong các cấu trúc plasmid cho việc sử dụng trong một loạt các vi khuẩn Gram dương. So sánh các mẫu biểu hiện gen người điều khiển (reporter gene) với các biến thể được xây dựng theo cách thông thường cho thấy rằng sự hiện diện của các vị trí tái tổ hợp còn lại (att) không ảnh hưởng đến các mẫu biểu hiện gen, mặc dù mức độ biểu hiện gen tổng thể có thể khác nhau. Việc xây dựng nhanh chóng các vector mới này đã cho phép tối ưu hóa sự kết hợp vector/gen sau khi đánh giá các cấu trúc plasmid trong các tế bào vi khuẩn khác nhau và cho thấy lợi ích của việc xây dựng plasmid sử dụng phương pháp tái tổ hợp Gateway. Các vị trí att còn lại có mặt sau khi tái tổ hợp Gateway không làm ảnh hưởng đến các mẫu kích thích promoter trong vi khuẩn Gram dương và không có bằng chứng về sự khác biệt trong độ ổn định mRNA của các bản sao. Tuy nhiên, mức độ biểu hiện gen tổng thể có thể bị giảm, có thể do một sự kiện sau phiên mã nào đó. Các vector mới được mô tả ở đây cho phép việc tái tổ hợp nhanh hơn, hiệu quả hơn trong nhiều loại vi khuẩn Gram dương.
Từ khóa
#Gateway cloning #Gram-positive bacteria #plasmid constructs #gene expression #reporter geneTài liệu tham khảo
Bushman W, Thompson JF, Vargas L, Landy A: Control of directionality in lambda site specific recombination. Science 1985, 230: 906-911. 10.1126/science.2932798
Hartley JL, Temple GF, Brasch MA: DNA cloning using in vitro site-specific recombination. Genome Res 2000, 10: 1788-1795. 10.1101/gr.143000
Sasaki Y, Sone T, Yoshida S, Yahata K, Hotta J, Chesnut JD, Honda T, Imamoto F: Evidence for high specificity and efficiency of multiple recombination signals in mixed DNA cloning by the Multisite Gateway system. J Biotechnol 2004, 107: 233-243. 10.1016/j.jbiotec.2003.10.001
Cheo DL, Titus SA, Byrd DR, Hartley JL, Temple GF, Brasch MA: Concerted assembly and cloning of multiple DNA segments using in vitro site-specific recombination: functional analysis of multi-segment expression clones. Genome Res 2004, 10B: 2111-2120. 10.1101/gr.2512204
Bernard P, Gabant P, Bahassi EM, Couturier M: Positive selection vectors using the F plasmid ccdB killer gene. Gene 1994, 148: 71-74. 10.1016/0378-1119(94)90235-6
Bae T, Schneewind O: Allelic replacement in Staphylococcus aureus with inducible counter-selection. Plasmid 2006, 55: 58-63. 10.1016/j.plasmid.2005.05.005
Peschke U, Beuck V, Bujard H, Gentz R, Le Grice S: Efficient utilization of Escherichia coli transcriptional signals in Bacillus subtilis . J Molec Biol 1985, 186: 547-555. 10.1016/0022-2836(85)90129-9
Qazi SNA, Rees CED, Mellits KH, Hill PJ: Development of gfp vectors for expression in Listeria monocytogenes and other low G+C Gram positive bacteria. Microbial Ecol 2001, 41: 301-309.
Qazi SNA, Counil E, Morrissey J, Rees CED, Cockayne A, Winzer K, Chan WC, Williams P, Hill PJ: agr expression precedes escape from the endosome of Staphylococcus aureus . Infec Immun 2001, 69: 7074-7082. 10.1128/IAI.69.11.7074-7082.2001
Qazi SNA, Harrison SE, Self T, Williams P, Hill PJ: Realtime monitoring of intracellular Staphylococcus aureus replication. J Bacteriol 2003, 186: 1065-1077. 10.1128/JB.186.4.1065-1077.2004
Schmiedel D, Kintrup M, Kuster E, Hillen W: Regulation of expression, genetic organisation and substrate specificity of xylose uptake in Bacillus megaterium . Molec Microbiol 1997, 23: 1053-1062. 10.1046/j.1365-2958.1997.2881654.x
Hill PJ, Hall L, Vinicombe DA, Soper CJ, Setlow P, Waites WM, Denyer S, Stewart GSAB: Bioluminescence and spores as biological indicators of inimical processes. J Appl Bacteriol 1994, 76: 129S-134S.
Vellanoweth RL: Translation and its regulation. In Bacillus subtilis and Other Gram-Positive Bacteria Biochemistry, Physiology and Molecular Genetics. Edited by: Sonenshein AL, Hoch JA, Losick R. Washington, DC: ASM Press; 1993:699-711.
Pilgrim S, Stritzker J, Schoen C, Kolb-Maurer A, Geginat G, Loessner MJ, Gentschev I, Goebel W: Bactofection of mammalian cells by Listeria monocytogene s: improvement and mechanism of DNA delivery. Gene Ther 2003, 10: 2036-2045. 10.1038/sj.gt.3302105
Bron S, Bolhuis A, Tjalsma H, Holsappel S, Venema G, van Dijl JM: Protein secretion and possible roles for multiple signal peptidases for precursor processing in Bacilli. J Biotechnol 1998, 64: 3-13. 10.1016/S0168-1656(98)00099-6
Setlow P: Resistance of bacterial spores. In Bacterial stress responses. Edited by: Storz G, Hengge-Aronis R. Washington, D.C. ASM Press; 2000:217-230.
Harwood CR, Cutting SM: Molecular Biological Methods for Bacillus. Chichester: John Wiley & Sons; 1990.
Errington J: Bacillus subtilis sporulation: regulation of gene expression and control of morphogenesis. Microbiol Rev 1993, 57: 1-33.
Franklin TJ, Snow GA: Biochemistry and Molecular Biology of Antimicrobial Drug Action. 6th edition. USA, Springer; 2005.
Thakker-Varia S, Ranzini AC, Dubin DT: Ribosomal RNA methylation in Staphylococcus aureus and Escherichia coli : effect of the "MLS" (erythromycin resistance) methylase. Plasmid 1985, 14: 152-161. 10.1016/0147-619X(85)90075-7
Premaratne RJ, Lin WJ, Johnson EA: Development of an improved chemically defined minimal medium for Listeria monocytogenes . Appl Environ Microbiol 1991, 57: 3046-3048.
Potvin BW, Kelleher RJ, Gooder HW: Pyrimidine biosynthetic pathway of Bacillus subtilis . J Bacteriol 1975, 123: 604-605.
Sebulsky MT, Hohnstein D, Hunter MD, Heinrichs DE: Identification and characterization of a membrane permease involved in ironhydroxamate transport in Staphylococcus aureus . J Bacteriol 2000, 182: 4394-4400. 10.1128/JB.182.16.4394-4400.2000
Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T: Molecular cloning: a laboratory manual. 2nd edition. USA, Cold Spring Harbor Laboratory Press; 1989.
Augustin J, Gotz F: Transformation of Staphylococcus epidermidis and other staphylococcal specieswith plasmid DNA by electroporation. FEMS Microbiol Lett 1990, 66: 203-208. 10.1111/j.1574-6968.1990.tb03997.x
Park SF, Stewart GSAB: High-efficiency transformation of Listeria monocytogenes by electroporation of penicillin treated cells. Gene 1990, 94: 129-132. 10.1016/0378-1119(90)90479-B
Brosius J, Dull TJ, Sleeter DD, Noller HF: Gene organization and primary structure of a ribosomal RNA operon from Escherichia coli . J Molec Biol 1981, 148: 107-127. 10.1016/0022-2836(81)90508-8
Sullivan MA, Yasbin RE, Young FE: New shuttle vectors for Bacillus subtilis and Escherichia coli which allow rapid detection of inserted fragments. Gene 1984, 29: 21-26. 10.1016/0378-1119(84)90161-6