Chiến lược RT-PCR cạnh tranh để đánh giá định lượng sự biểu hiện của thụ thể hormone tăng trưởng loại I ở cá rô phi (Oreochromis niloticus)

Alina Rodríguez-Mallón1, Yamilet Cárdenas1, Juana María Lugo1, Aymé Oliva1, Antonio Morales1, Mario Pablo Estrada1
1Aquatic Biotechnology Department, Animal Biotechnology Division, Center for Genetic Engineering and Biotechnology. P.O. Box 6162, Havana, 10 600, Cuba

Tóm tắt

Tóm tắt Việc định lượng sự biểu hiện gen yêu cầu phải đo lường chính xác một bản sao cụ thể. Trong bài báo này, một kỹ thuật phản ứng chuỗi polymerase phiên mã ngược định lượng (RT-PCR) bằng cách cạnh tranh cho thụ thể hormone tăng trưởng loại I của cá rô phi đã được thiết kế và xác thực. Quy trình thí nghiệm này đã được sử dụng để xác định sự phong phú của bản sao thụ thể hormone tăng trưởng loại I trong các mô khác nhau của cá rô phi. Các kết quả thu được từ RT-PCR cạnh tranh đã phát triển này tương tự như các kết quả PCR thời gian thực đã được báo cáo gần đây. Giao thức này cung cấp một lựa chọn đáng tin cậy, nhưng có chi phí thấp hơn so với PCR thời gian thực để định lượng các gen cụ thể.

Từ khóa


Tài liệu tham khảo

Behncken SN, Waters MJ: Molecular recognition events involved in the activation of the growth hormone receptor by growth hormone. J Mol Recognit. 1999, 12: 355-362. 10.1002/(SICI)1099-1352(199911/12)12:6<355::AID-JMR477>3.0.CO;2-K.

Zhu T, Goh EL, Graichen R, Ling L, Lobie PE: Signal transduction via the growth hormone receptor. Cell Signal. 2001, 13: 599-616. 10.1016/S0898-6568(01)00186-3.

Kopchick JJ, Andry JM: Growth hormone (GH), GH receptor, and signal transduction. Mol Genet Metab. 2000, 71: 293-314. 10.1006/mgme.2000.3068.

Lee LT, Nong G, Chan YH, Tse DL, Cheng CH: Molecular cloning of a teleost growth hormone receptor and its functional interaction with human growth hormone. Gene. 2001, 270: 121-129. 10.1016/S0378-1119(01)00488-7.

Calduch-Giner J, Duval H, Chesnel F, Boeuf G, Perez-Sanchez J, Boujard D: Fish growth hormone receptor: molecular characterization of two membrane-anchored forms. Endocrinology. 2001, 142: 3269-3273. 10.1210/en.142.7.3269.

Tse DL, Tse MC, Chan CB: Seabream growth hormone receptor: molecular cloning and functional studies of the full-length cDNA, and tissue expression of two alternatively spliced forms. Biochim Biophys Acta. 2003, 1625: 64-76.

Calduch-Giner JA, Mingarro M, Vega-Rubin de Celis S, Boujard D, Perez-Sanchez J: Molecular cloning and characterization of gilthead sea bream (Sparus aurata) growth hormone receptor (GHR). Assessment of alternative splicing. Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol. 2003, 136: 1-13. 10.1016/S1096-4959(03)00150-7.

Fukada H, Ozaki Y, Pierce AL: Salmon growth hormone receptor: molecular cloning, ligand specificity, and response to fasting. Gen Comp Endocrinol. 2004, 139: 61-71. 10.1016/j.ygcen.2004.07.001.

Very NM, Kittilson JD, Norbeck LA, Sheridan MA: Isolation, characterization, and distribution of two cDNAs encoding for growth hormone receptor in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol. 2005, 140: 615-628. 10.1016/j.cbpc.2004.12.008.

Jiao B, Huang X, Chan CB, Zhang L, Wang D, Cheng CH: The co-existence of two growth hormone receptors in teleost fish and their differential signal transduction, tissue distribution and hormonal regulation of expression in seabream. J Mol Endocrinol. 2006, 36: 23-40. 10.1677/jme.1.01945.

Saera-Vila A, Calduch-Giner JA, Perez-Sanchez J: Duplication of growth hormone receptor (GHR) in fish genome: gene organization and transcriptional regulation of GHR type I and II in gilthead sea bream (Sparus aurata). Gen Comp Endocrinol. 2005, 142: 193-203. 10.1016/j.ygcen.2004.11.005.

Raeymaekers L: Basic principles of quantitative PCR. Mol Biotechnol. 2000, 15: 115-122. 10.1385/MB:15:2:115.

Chomczynski P, Sacchi N: Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate–phenol–chloroform extraction. Anal Biochem. 1987, 162: 156-159. 10.1016/0003-2697(87)90021-2.

Sanger F, Nicklen S, Coulson AR: DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proc Natl Acad Sci USA. 1977, 74: 5463-5467. 10.1073/pnas.74.12.5463.

Möller S, Edvinsson L: A strategy for the generation of RNA competitors in competitive RT-PCR. Technical Tips Online. 1999, T01604 1999, [http://tto.trends.com]

Raeymaekers L: Quantitative PCR: theoretical considerations with practical implications. Anal Biochem. 1993, 214: 582-585. 10.1006/abio.1993.1542.

Karlen Y, McNair A, Perseguers S, Mazza C, Mermod N: Statistical significance of quantitative PCR. BMC Bioinformatics. 2007, 8: 131-10.1186/1471-2105-8-131.

Mueller J, Gessner M, Remberg A, Hoch J, Zerlauth G, Hanfland P: Development, validation and evaluation of a homogenous one-step reverse transcriptase-initiated PCR assay with competitive internal control for the detection of hepatitis C virus RNA. Clin Chem Lab Med. 2005, 43: 827-833. 10.1515/CCLM.2005.139.

Ferre F: The polymerase chain reaction. 1994, Birkhauser, Basel

Cavari S, Ruggiero M, Vannucchi S: Antiproliferative effects of heparin on normal and transformed NIH/3T3 fibroblasts. Cell Biol Int. 1993, 17: 781-786. 10.1006/cbir.1993.1140.

Yada H, Hosokawa K, Tajima K, Hasegawa Y, Kotsuji F: Role of ovarian theca and granulosa cell interaction in hormone production and cell growth during the bovine follicular maturation process. Biol Reprod. 1999, 61: 1480-1486. 10.1095/biolreprod61.6.1480.

Trudeau VL: Neuroendocrine regulation of gonadotrophin II release and gonadal growth in the goldfish, Carassius auratus. Rev Reprod. 1997, 2: 55-68. 10.1530/ror.0.0020055.

Sakamoto T, Shepherd BS, Madsen SS: Osmoregulatory actions of growth hormone and prolactin in an advanced teleost. Gen Comp Endocrinol. 1997, 106: 95-101. 10.1006/gcen.1996.6854.

Pierce AL, Fox BK, Davis LK: Prolactin receptor, growth hormone receptor, and putative somatolactin receptor in Mozambique tilapia: tissue specific expression and differential regulation by salinity and fasting. Gen Comp Endocrinol. 2007, 154: 31-40. 10.1016/j.ygcen.2007.06.023.