Hideki Muramatsu1, Daiei Kojima1, Yusuke Okuno2, Shinsuke Kataoka1, Yoko Nakajima3, Tetsuya Ito3, Ikuya Tsuge3, Sakai Yoshimi4, Tomoaki Kato4, Seiji Kojima1, Yoshiyuki Takahashi1
1Department of Pediatrics, Nagoya University Graduate School of Medicine, Nagoya, Japan
2Center for Advanced Medicine and Clinical Research, Nagoya University Hospital, Nagoya, Japan
3Department of Pediatrics, Fujita Health University, Toyoake, Japan
4Aichi Health Promotion Foundation, Nagoya, Japan
Tóm tắt
Tóm tắt
GIỚI THIỆU
Bệnh suy giảm miễn dịch phối hợp nặng (SCID) là hình thức nghiêm trọng nhất của các rối loạn suy giảm miễn dịch nguyên phát (PIDs). Sự suy yếu của miễn dịch tế bào và miễn dịch thể dịch khiến trẻ sơ sinh bị ảnh hưởng dễ bị mắc nhiều loại nhiễm trùng, dẫn đến tử vong trong vòng 2 năm đầu đời. Trẻ sơ sinh bị ảnh hưởng không có triệu chứng khi sinh, bệnh chưa điều trị dẫn đến tử vong, và việc điều trị kịp thời (ví dụ: ghép tế bào gốc huyết học, liệu pháp gen hoặc liệu pháp thay thế enzyme) có liên quan đến sự cải thiện đáng kể về kết quả. Do đó, SCID đáp ứng các tiêu chí bệnh tật để sàng lọc trẻ sơ sinh (NBS). Vòng cắt của thụ thể tế bào T (TREC) là một dấu ấn tuyệt vời của các tế bào T mới hình thành, và việc đo lường TREC dựa trên PCR định lượng là một công cụ xuất sắc trong sàng lọc NBS dựa trên quần thể cho SCID.
Các tiến bộ gần đây trong giải trình tự thế hệ tiếp theo (NGS) đã cho phép giải trình tự đồng thời nhiều axit nucleic, phát hiện các thay đổi nucleotide đơn và các biến thể số lượng bản sao. Chúng tôi đã khởi động một chương trình sàng lọc trẻ sơ sinh tùy chọn thí điểm cho SCID, kết hợp việc đo lường TREC và NGS tại Nhật Bản.
NGƯỜI BỆNH VÀ PHƯƠNG PHÁP
Chúng tôi đã đo lường số lượng bản sao TREC bằng Bộ xét nghiệm TREC sơ sinh Enlite™ (Perkin Elmer, Turku, Phần Lan), sử dụng phương pháp khuếch đại đôi của TREC và beta-actin trong cùng một phản ứng cho mỗi mẫu. Chúng tôi đã sử dụng các giá trị cắt TREC âm như sau: số lượng bản sao TREC <30 copies/μL và số lượng bản sao beta-actin ≥50 copies/μL. Đối với những bệnh nhân có kết quả TREC âm tính, DNA gen đã được đưa vào quá trình thu thập DNA được thiết kế bằng SureDesign (Agilent, Santa Clara, Hoa Kỳ), bao phủ tổng cộng 349 gen liên quan đến PIDs, hội chứng suy tủy xương di truyền, và vùng 22q11.2. Việc thu thập mục tiêu, tăng cường và lập chỉ mục được thực hiện theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Các thư viện được tạo ra đã được giải trình tự bằng nền tảng HiSeq 2500 (Illumina, San Diego, Hoa Kỳ). Nghiên cứu này đã được phê duyệt bởi các ủy ban đạo đức của Trường Cao học Y Nagoya và Đại học Y tế Fujita.
KẾT QUẢ
Từ tháng 4 năm 2017 đến tháng 3 năm 2018, chúng tôi đã sàng lọc tổng cộng 22.865 trẻ sơ sinh, chiếm 57% tổng số ca sinh tại tỉnh Aichi, Nhật Bản. Chúng tôi đã phát hiện 48 trẻ sơ sinh (0,21%) có kết quả TREC âm tính. Các trẻ sơ sinh này đã được giới thiệu đến Bệnh viện Đại học Nagoya hoặc Bệnh viện Đại học Y tế Fujita và nhận được các xét nghiệm miễn dịch kỹ lưỡng, bao gồm giải trình tự thu được mục tiêu. Trong số đó, 12 trẻ (25%) có các bệnh nền, bao gồm hội chứng Down (n = 4), khuyết tật đường tiêu hóa (n = 3), thoát vị dia phragm bẩm sinh (n = 2), tràn dịch màng phổi bẩm sinh (n = 2), và dị tật tim bẩm sinh nghiêm trọng (n = 1).
Đánh giá miễn dịch đã xác định 11 trẻ (23%) có tình trạng giảm bạch cầu lympho (<1500 /μL). Những trẻ này đã tránh tiêm vắc xin sống và được can thiệp thích hợp để phòng ngừa nhiễm trùng. Sử dụng phân tích giải trình tự mục tiêu, chúng tôi đã xác định bốn bệnh nhân có PIDs, bao gồm hội chứng mất đoạn 22q11.2 (n = 2), hội chứng Wiskott‒Aldrich (n = 1), và suy giảm miễn dịch phối hợp với gen nguyên nhân không xác định (n = 1).
KẾT LUẬN
Chúng tôi đã thành công trong việc khởi động một chương trình sàng lọc trẻ sơ sinh tùy chọn thí điểm cho SCID, kết hợp việc đo lường TREC và NGS tại Nhật Bản. Chúng tôi không xác định được các bệnh nhân SCID điển hình có thể do kích thước mẫu tương đối nhỏ. Tuy nhiên, chương trình sàng lọc trẻ sơ sinh này, bao gồm một xét nghiệm NGS như là một thử nghiệm thứ hai, đã đạt được những chẩn đoán chính xác sớm về các bệnh nhân có PIDs khác có kết quả TREC âm tính. Do đó, chương trình này có thể hỗ trợ quản lý bệnh nhân và tối ưu hóa kết quả điều trị.
Các tiết lộ
Không có xung đột lợi ích nào có liên quan để khai báo.
