Anna Luise Bernhardt1, Sascha Kretschmann1, Judith Bausenwein1, Heidi Balzer1, Andreas Mackensen2, Anita Natalie Kremer1
1Department of Internal Medicine 5, Hematology and Oncology, Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg, Erlangen, Germany
2University of Erlangen-Nuernberg - Hematology/Oncology, Erlangen, Germany
Tóm tắt
Tóm tắt
Giới thiệu:
Việc tách biệt hiệu ứng cấy ghép chống lại bệnh bạch cầu (GvL) khỏi bệnh ghép chống lại chủ thể (GvHD) là một mục tiêu lớn sau khi ghép tế bào gốc đồng loại. Gần đây, chúng tôi đã mô tả hai loại kháng nguyên nội sinh chịu sự hạn chế bởi HLA lớp II tùy thuộc vào hành vi của chúng đối với HLA-DM. Trong khi các kháng nguyên kháng DM được trình diện trong sự hiện diện của HLA-DM, việc trình diện các kháng nguyên nhạy cảm DM phụ thuộc vào sự đồng biểu hiện của HLA-DO - chất ức chế tự nhiên của HLA-DM. Bởi vì sự biểu hiện của HLA-DO không tăng lên do các cytokine viêm và chỉ giới hạn ở các tế bào B, tế bào tua và tế bào biểu mô tuyến ức, các kháng nguyên nhạy cảm DM không thể được trình diện trên các mô không huyết học. Do đó, việc sử dụng tế bào T CD4 nhắm vào các kháng nguyên nhạy cảm DM có thể cho phép tách biệt GvL khỏi GvHD. Tuy nhiên, vẫn chưa rõ liệu tính miễn dịch và tiềm năng chống khối u của các kháng nguyên nhạy cảm DM và kháng DM có đặc tính tương đương trong môi trường sống hay không.
Phương pháp:
Do đó, chúng tôi đã tìm cách tạo ra một hệ thống in vivo sử dụng một biến thể nhạy cảm DM và một biến thể kháng DM của cùng một kháng nguyên mô hình. Đầu tiên, chúng tôi đã tạo ra các dòng tế bào murine quá biểu hiện H2-M hoặc H2-O (HLA-DM murine hoặc HLA-DO, tương ứng) để phân loại hai kháng nguyên mô hình ovalbumin (OVA) và kháng nguyên nhiễm sắc thể Y của murine DBY vào từng loại của chúng. Hơn nữa, chúng tôi đã tiến hành một đến ba sự thay thế amino acid trong các épitope tế bào T bị hạn chế bởi MHC II của hai kháng nguyên và thử nghiệm tính nhạy cảm DM hoặc khả năng kháng DM bằng cách kích hoạt tế bào T sử dụng sự phát triển và tiết IFN-g làm đầu ra in vitro. Cuối cùng, chúng tôi đã tiêm chủng cho chuột B6 với các biến thể epitop đã tạo ra và đo lường sự mở rộng, kiểu hình và phản ứng của các tế bào T CD4 nhắm vào OVA hoặc DBY trong môi trường sống.
Kết quả:
Bằng cách thử nghiệm sự nhận diện tế bào T của OVA hoặc DBY trên các dòng tế bào B murine quá biểu hiện H2-M và H2-O, tương ứng, chúng tôi đã cho thấy rằng OVA dẫn đến sự kích hoạt tế bào T mạnh mẽ hơn trong sự hiện diện của H2-O, chứng tỏ tính nhạy cảm DM của nó. Ngược lại, epitope hoang dã của DBY không phụ thuộc vào sự biểu hiện của H2-O để kích hoạt tế bào T mạnh mẽ và do đó được đánh giá là kháng nguyên kháng DM. Bằng cách giới thiệu một đến ba sự thay thế amino acid trong epitope tế bào T, chúng tôi đã có thể tạo ra một biến thể nhạy cảm DM khác của OVA nhưng cũng hai biến thể kháng DM. Tương tự, chúng tôi đã thiết kế cả biến thể epitope kháng DM và nhạy cảm DM của murine DBY. Để đánh giá độ gắn kết của thụ thể tế bào T đối với các biến thể epitop của chúng tôi trình diện trên các tế bào trình diện kháng nguyên tự nhiên, chúng tôi đã thực hiện việc titration các biến thể nhạy cảm DM và kháng DM của cùng một kháng nguyên trên các tế bào lách không điều trị từ chuột mang thụ thể tế bào T OVA hoặc DBY. Chúng tôi đã quan sát thấy sự kích hoạt tương đương của cùng một dòng tế bào T được kích hoạt bởi bất kỳ biến thể nào của epitope như được đo bằng sự phát triển và tiết IFN-g. Thêm vào đó, sau khi tiêm chủng cho chuột B6 với bất kỳ biến thể nào của epitope, chúng tôi đã đo lường sự mở rộng, kiểu hình và phản ứng tương ứng của tế bào T nhắm vào OVA và DBY cả trong môi trường sống và ngoài cơ thể.
Kết luận:
Chúng tôi đã thành công trong việc tạo ra các biến thể nhạy cảm DM và kháng DM của cùng một epitope cho hai kháng nguyên mô hình OVA và murine DBY. Với công cụ này, chúng tôi đã chứng minh rằng các kháng nguyên nhạy cảm DM không kém hơn so với đối tác kháng DM của chúng. Do đó, việc nhắm mục tiêu vào các kháng nguyên nhạy cảm DM sau khi ghép tế bào gốc đồng loại có thể là một công cụ thú vị để cải thiện hiệu ứng GvL với chỉ GvHD có giới hạn.
